一种快速质粒抽提纯化试剂盒及其应用

摘要：

本发明公开了一种快速质粒抽提纯化试剂盒及进行细菌质粒抽提纯化的方法，其试剂盒包括下列独立存在的液体：无碱含酶菌体裂解液，DNA结合柱前处理液，DNA质粒结合液，清洗液，洗脱液。使用本试剂盒进行细菌质粒抽提纯化的方法包括如下步骤：裂解菌体；前处理DNA结合柱；结合质粒DNA；清洗；洗脱。使用本发明试剂盒及质粒抽提纯化方法，可在3-5分钟内快速有效地完成质粒抽提纯化工作，大大缩短抽提时间；所得到的质粒DNA，经使用分光光度计检测，A₂₆₀/A₂₈₀值达1.7-2.0；还可以用于大批量样品抽提，在紧急情况下抽提纯化质粒；并为质粒抽提的自动化和大规模化奠定了技术基础。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410047132.6

申请日期：2004-12-31

公开/公告号：CN1654660

公开/公告日：2005-08-17

主分类号：C12N15/63

申请/专利权人:李乐攻%李东屏%黄咏

发明/设计人:李乐攻;李东屏;黄咏

主申请人地址:410013湖南省长沙市桐梓坡高新区MO栋南五楼

专利代理机构:长沙星耀专利事务所

代理人:宁星耀%李展明

国别省市代码:湖南;43

权利要求：

1、一种质粒抽提纯化试剂盒，其特征在于，至少包括下列四种独立存在的液体：菌体裂解液，DNA结合柱前处理液，DNA质粒结合液，清洗液；所述菌体裂解液配方：葡萄糖10mM-1M，三氨基甲烷盐酸20mM-1M，乙二胺四乙酸10mM-500mM，碳酸氢钠100mM-500mM，曲拉通1％-50％(体积/体积)，十二烷基磺酸钠1％-25％(重量/体积)，溶菌酶2mg/ml-1000mg/ml，核糖核酸酶5-50mg/ml；所述DNA结合柱前处理液配方：氯化锂或氯化钠10mM-5M，氢氧化钾或氢氧化钠100mM-2M，十二烷基磺酸钠5％-20％(重量/体积)，盐酸0.01M-2.5M；所述DNA质粒结合液的配方：盐酸胍1M-6M，氯化钠10mM-100mM，吗啉代乙烷磺酸10mM-100mM，异丙醇；四者体积配比：40∶40∶10∶10所述清洗液配方：三氨基甲烷盐酸1-50mM，再加入乙醇70-85％(体积)。