核酸连接酶反应与核酸连接酶链式反应的实时检测方法

摘要：

本发明涉及一种单核苷酸多态性的分析技术。本发明检测方法使用的检测系统由分子信标核酸探针，扩增核酸片段以及Taq连接酶在相应的缓冲溶液中组成；对单、双链核酸片段的LDR实时分析和对单、双链核酸片段的LCR实时分析，是在缓冲液中加入分子信标，Taq连接酶以及扩增引物，然后加入待分析的单双链目标核酸，进行LDR、LCR温度循环，在低温循环期检测样品荧光强度。本发明利用了Taq连接酶、核酸以及分子信标核酸探针的特性，为单核苷酸多态性分析方法研究提供了新的技术和思路。具有重要的科学价值和广阔的市场前景，有较大的社会效益和经济效益。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410046658.2

申请日期：2004-08-13

公开/公告号：CN1626675

公开/公告日：2005-06-15

主分类号：C12Q1/68

申请/专利权人:湖南大学

发明/设计人:王柯敏;唐志文;谭蔚泓

主申请人地址:410082湖南省长沙市河西岳麓山湖南大学化学生物传感与计量学国家重点实验室

专利代理机构:湖南兆弘专利事务所

代理人:张美娟

国别省市代码:湖南;43

权利要求：

1、一种核酸连接酶反应与核酸连接酶链式反应的实时检测方法，其特征在于该方法使用的检测系统由环部与分析核酸片段序列近似匹配、尾部一端带有荧光标记另一端带有荧光标记或者荧光熄灭基团的分子信标核酸探针，与目标核酸序列相匹配的两段或两段以上扩增引物以及Taq连接酶在相应的缓冲溶液中组成，(1)对单、双链目标核酸的LDR检测方法为：在缓冲液中加入分子信标、Taq连接酶以及两段扩增引物，然后加入待分析的单链或双链目标核酸，进行LDR温度循环，其中连接扩增温度为40～55℃，时间1～8分钟，DNA解链温度为70～95℃，维持1～5分钟，在连接扩增期间检测样品荧光强度；(2)对单、双链目标核酸的LCR检测方法为：在缓冲液中加入分子信标、Taq连接酶以及两段和另两段不同浓度的扩增引物，然后加入待分析的单链或双链目标核酸，进行LCR温度循环，其中连接扩增温度为40～55℃，时间1～8分钟，DNA解链温度为70～95℃，维持1～5分钟，在连接扩增期间检测样品荧光强度；