对肿瘤细胞有促凋亡功能的Survivin突变体重组腺病毒及获得方法

摘要：

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及生物基因工程技术。所述的Survivin突变体重组腺病毒，将Survivin基因序列的第158位碱基a突变为c，蛋白质序列第53位氨基酸D相应地突变为A。其获得方法包括引入突变、构建质粒和包装病毒。引入突变的步骤是首先根据已知野生型Survivin序列设计引物1和引物2，再根据突变原理设计含突变的引物3和引物4；用引物1和引物2从HeLa库中钓出Survivin基因，再分别扩增Survivin左右两部分片段，回收后等量加入，变性退火再循环，形成全长双链Survivin后进行第三轮PCR循环，扩增出含突变的Survivin(Surv-D53A)，此后再通过生物基因工程中常用方法构建质粒和包装病毒。从多项实验结果看出，本发明的重组腺病毒强烈诱导肝癌细胞、子宫颈癌细胞、肺癌细胞等癌细胞凋亡。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410041045.X

申请日期：2004-06-17

公开/公告号：CN1710080

公开/公告日：2005-12-21

主分类号：C12N15/861

申请/专利权人:中国科学技术大学

发明/设计人:吴 缅;那沙·阿丁·霍蒂;朱的娥;宋质银;王 宜

主申请人地址:230026安徽省合肥市金寨路96号中国科学技术大学专利办公室

专利代理机构:合肥华信专利商标事务所

代理人:余成俊

国别省市代码:安徽;34

权利要求：

1.一种对肿瘤细胞有促凋亡功能的Survivin突变体重组腺病毒，包括突变的Survivin基因，其特征在于，所述的Survivin基因序列的第158位碱基a突变为c，其基因序列表达式为atgggtgccccgacgttgccccctgcctggcagccctttctcaaggaccaccgcatctctacattcaagaactggcccttcttggagggctgcgcctgcaccccggagcggatggccgaggctggcttcatccactgccccactgagaacgagccagc158cttggcccagtgtttcttctgcttcaaggagctggaaggctgggagccagatgacgaccccatagaggaacataaaaagcattcgtccggttgcgctttcctttctgtcaagaagcagtttgaagaattaacccttggtgaatttttgaaactggacagagaaagagccaagaacaaaattgcaaaggaaaccaacaataagaagaaagaatttgaggaaactgcgaagaaagtgcgccgtgccatcgagcagctggctgccatggattga蛋白质序列第53位氨基酸D相应地突变为A，蛋白质序列表达式为：MGAPTLPPAWQPFLKDHRISTFKNWPFLEGCACTPERMAEAGFIHCPTENEPA53LAQCFFCFKELEGWEPDDDPIEEHKKHSSGCAFLSVKKQFEELTLGEFLKLDRERAKNKIAKETNNKKKEFEETAKKVRRAIEQLAAMD