一种制备小干涉RNA分子的方法

摘要：

本发明公开了一种制备小干涉RNA分子的方法。它包括以下步骤：1)分别合成小干涉RNA分子的正义链和反义链的DNA模板及通用杂交寡核苷酸；所述DNA模板的有义链自5′到3′方向依次包括启动子序列、不含有碱基T的引导序列、与该引导序列紧密相连的靶序列和与该靶序列紧密相连的3′末端的两个碱基TT；所述通用杂交寡核苷酸为与所述引导序列互补的单链寡核苷酸；2)分别用RNA聚合酶转录出一端带有所述引导序列的正义链RNA和反义链RNA；3)将正义链RNA和反义链RNA等摩尔比混合，并退火得到两端带有所述引导序列的双链RNA；4)以与所述双链RNA 2∶1的摩尔比加入通用杂交寡核苷酸，得到DNA-RNA杂合分子；用RNase H切除所述杂合分子中带有的引导序列，得到小干涉RNA分子。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410034027.9

申请日期：2004-04-21

公开/公告号：CN1690217

公开/公告日：2005-11-02

主分类号：C12P19/34

申请/专利权人:中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所

发明/设计人:朱旭东;黄培堂

主申请人地址:100071北京市丰台区东大街20号军医科院生物工程研究所

专利代理机构:北京纪凯知识产权代理有限公司

代理人:关 畅

国别省市代码:北京;11

权利要求：

1、一种制备小干涉RNA分子的方法，包括以下步骤：1)分别合成小干涉RNA分子的正义链和反义链的DNA模板及通用杂交寡核苷酸；所述小干涉RNA分子的正义链和反义链的DNA模板均为互补的双链；所述DNA模板的有义链自5′到3′方向依次包括启动子序列、不含有碱基T的引导序列、与该引导序列紧密相连的靶序列和与该靶序列紧密相连的3′末端的两个碱基TT；所述通用杂交寡核苷酸为与所述引导序列互补的单链寡核苷酸；2)分别用RNA聚合酶将步骤1)中合成的小干涉RNA分子的正义链和反义链的DNA模板转录出一端带有步骤1)所述DNA模板的有义链中的引导序列的正义链RNA和反义链RNA；3)将带有步骤1)所述DNA模板的有义链中的引导序列的正义链RNA和反义链RNA等摩尔比混合，并退火得到两端带有步骤1)所述DNA模板的有义链中的引导序列的双链RNA；4)以与步骤3)中所述双链RNA2∶1的摩尔比加入所述通用杂交寡核苷酸，反应形成DNA-RNA杂合分子；用RNaseH切除所述DNA-RNA杂合分子中带有的步骤1)所述DNA模板的有义链中的引导序列，得到小干涉RNA分子。