三种新型尿激酶原突变体

摘要：

为了消除凝血酶的作用位点，消弱纤溶酶原激活剂抑制剂-1(plaminogen activator inhibitor-1，PAI-1)与尿激酶原的结合，使尿激酶原突变体对凝血酶和PAI-1的抵抗力提高，从而延长尿激酶原在血浆中的半衰期和降低尿激酶原的临床使用量，对天然尿激酶原基因采用PCR定点诱变法进行了突变，对第156位精氨酸(Arg¹⁵⁶)突变为组氨酸(His¹⁵⁶)；对第178，179，181位的精氨酸(^{178，179，181})突变为Lys¹⁷⁸、Lys¹⁷⁹和His¹⁸¹；同时在第156和第178，179，181位的精氨酸(Arg^{156，178，179，181})突变为His¹⁵⁶、Lys¹⁷⁸、Lys¹⁷⁹和His¹⁸¹，获得三种尿激酶原突变体。经序列分析后，连接到动物细胞表达载体，通过脂质体介导将尿激酶原突变体转入中国仓鼠卵巢细胞进行表达，分析了其特点。并用于细菌、酵母和动物生物反应器的表达。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410033936.0

申请日期：2004-04-21

公开/公告号：CN1690199

公开/公告日：2005-11-02

主分类号：C12N9/72

申请/专利权人:中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所

发明/设计人:于永生;邓继先;张正光

主申请人地址:100071北京市丰台区东大街20号生物工程研究所

国别省市代码:北京;11

权利要求：

1.三种具有血栓溶解活性的尿激酶原(pro-UK)突变体(pro-UKm)，它们在天然pro-UK的氨基酸序列基础上经人工定向突变，除突变处的序列外，其它部分不变。三种突变体具有与天然pro-UK同样或更高的溶栓能力，比天然pro-UK有更好的稳定性和更长的半衰期。