从小麦麸皮中提取草酸氧化酶的方法

摘要：

从小麦麸皮中提取草酸氧化酶的方法涉及酶的制备技术。先用水冲洗麸皮，然后用缓冲液匀浆，离心收集沉淀。用相同缓冲液或蒸馏水淋洗沉淀至洗出液澄清后收集沉淀。接着用含1mol/L Nacl的缓冲液悬浮沉淀，水浴中保温1-1.5h后离心收集沉淀。用缓冲液或蒸馏水淋洗沉淀至洗出液澄清后收集沉淀。向沉淀中加入缓冲液，沸水浴15-20min后离心取沉淀，用缓冲液或蒸馏水淋洗沉淀至洗出液澄清后收集沉淀。然后用含胃蛋白的水溶液悬浮沉淀，在水浴中保温1-1.5h后离心收集沉淀，用缓冲液或蒸馏水淋洗沉淀至洗出液澄清。最后用真空浓缩干燥系统除去沉淀中的水分，得草酸氧化酶。每克麸皮可生产0.3-0.4g的酶制品，其活性为0.001-0.0015U/mg酶制品。本方法简便易行，成本低为此酶在医药、食品、饮料、造纸、农业等方面的应用奠定了基础。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410028155.2

申请日期：2004-07-21

公开/公告号：CN1597943

公开/公告日：2005-03-23

主分类号：C12N9/04

申请/专利权人:华南农业大学

发明/设计人:刘娥娥;彭新湘

主申请人地址:510642广东省广州市天河区五山华南农业大学

专利代理机构:广州市华学知识产权代理有限公司

代理人:伍宏达

国别省市代码:广东;44

权利要求：

1.从小麦麸皮中提取草酸氧化酶的方法，其特征在于：用水淋洗麸皮直至淋洗液澄清；按麸皮质量与缓冲液体积比为1∶10的比例加入50mmol/LpH7.5的Tris-HCl缓冲液进行匀浆，匀浆后，4℃-常温下1000-4000g离心约15-20min收集沉淀，再按麸皮质量与缓冲液体积比为1∶10的比例加入50mmol/LpH7.5的Tris-HCl缓冲液或蒸馏水，淋洗沉淀至洗出液澄清后收集沉淀；用含1mol/LNaCl50mmol/LpH7.5的Tris-HCl缓冲液悬浮上步得到的沉淀，加入上述缓冲液的体积为麸皮质量的10倍，在25-37℃水浴中保温1-1.5h，然后4℃-常温下1000-4000g离心15-20min，取沉淀，用50mmol/LpH7.5的Tris-HCl缓冲液或蒸馏水淋洗沉淀至洗出液澄清后收集沉淀；在沉淀中加入50mmol/LpH7.5的Tris-HCl缓冲液，加入缓冲液体积为麸皮质量的10倍，沸水浴15-20min后，4℃-常温下1000-4000g离心15-20min，取沉淀，用50mmol/LpH7.5的Tris-HCl缓冲液或蒸馏水洗沉淀至洗出液澄清后收集沉淀；将沉淀用体积为麸皮质量10倍pH为1.5-5.0每毫升含有50μg胃蛋白的水溶液悬浮，在25-37℃水浴中保温1-1.5h后，4℃-常温下1000-4000g离心20min取沉淀，用50mmol/LpH7.5的Tris-HCl缓冲液或蒸馏水淋洗沉淀至洗出液澄清为止，然后将沉淀在4℃下12,000g离心20min，用真空浓缩干燥系统除去沉淀中的水分，即为草酸氧化酶。