Leber’s遗传性视神经病的定量检测方法
本发明涉及Leber’s遗传性视神经病(LHON)的定量检测方法。本发明所述的定量检测方法，包括以下步骤：根据引起LHON的待检靶基因突变位点区域的DNA序列设计并合成一对引物和位于两个引物之间的荧光探针；对线粒体DNA待测样品在相同反应条件下分别加入阳性或阴性探针进行PCR扩增；通过加入已知浓度的标准样品绘制标准曲线，根据待测样品在标准曲线中的位置推算出初始模板的浓度；根据标准曲线求取不同探针显示的DNA初始反应拷贝数，确定突变比例。本发明为临床定量检测LHON提供了一种精确度高，特异性好，费时短，成本低，人为误差小，重复性好的方法，从而将目前尚处于定性检测LHON的技术引入到定量的精确水平。
发明专利
CN200410027623.4
2004-06-15
CN1712543
2005-12-28
C12Q1/68
中山大学中山眼科中心
易长贤;邓 燕
510060广东省广州市先烈南路54号中山眼科中心二区
广州华进联合专利商标代理有限公司
刘宇峰
广东;44
1、Leber′s遗传性视神经病的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：A)根据引起Leber′s遗传性视神经病的待检靶基因突变位点区域的DNA序列设计并合成一对引物和位于两个引物之间的荧光探针，所述的荧光探针包括阳性探针和阴性探针，各自标记不同的荧光，阳性探针可与突变的DNA链杂交，阴性探针可与正常DNA链杂交；B)对线粒体DNA待测样品在相同反应条件下分别加入阳性或阴性探针进行PCR扩增，监测反应体系中荧光信号的变化；C)通过加入已知浓度的标准样品绘制标准曲线，其中横坐标表示起始拷贝数的对数，纵坐标表示Ct值，Ct值为每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数，然后根据待测样品在标准曲线中的位置推算出初始模板的浓度；D)根据标准曲线求取不同探针显示的DNA初始反应拷贝数，求取每个探针的至少三个反应所得拷贝数的平均值，确定突变比例，该突变比例为阳性探针荧光显示的拷贝数与两种探针荧光显示的拷贝数之和的比值；不同浓度的样品测得的拷贝数不同，而同一样品的突变比例是不变的，由此可确证临床诊断结果。