基因工程重组胸腺素α1的制备工艺

摘要：

本发明涉及基因工程药物生物技术领域，具体涉及基因工程重组胸腺素α1的制备工艺。本发明要克服现有技术存在的成本高、价格昂贵，样品纯化复杂且污染环境的问题。它依次包括下述步骤，(1)重组胸腺素α1基因工程菌的构建：按照大肠杆菌惯用密码子将Tα1的28个氨基酸转化为核苷酸序列，在其基因前依次设计上核酸内切酶EcoRI、蛋氨酸、内切酶BamHI、天冬酰氨和甘氨酸对应的核苷酸序列；在其基因后依次设计上甘氨酸、核酸内切酶BglII、终止密码子和核酸内切酶PstI对应的核苷酸序列，采用酶切后实现基因的串联，得到Tα1的n(2-8)串体；(2)对基因工程菌进行诱导表达；(3)诱导基因工程菌的培养和高密度发酵；(4)融合蛋白的粗提、纯化和裂解；(5)胸腺素α1的纯化。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410025834.4

申请日期：2004-01-17

公开/公告号：CN1641026

公开/公告日：2005-07-20

主分类号：C12N15/16

申请/专利权人:党化宁

发明/设计人:党化宁

主申请人地址:710118陕西省西安市高新技术产业开发区长安科技园西部大道66号

专利代理机构:西安新思维专利事务所有限公司

代理人:黄秦芳

国别省市代码:陕西;61

权利要求：

1、基因工程重组胸腺素α1的制备工艺，其特征在于：它它依次包括下述步骤，(1)、重组Tα1基因工程菌的构建：按照大肠杆菌惯用密码子将Tα1的28个氨基酸转化为核苷酸序列，在其基因前依次设计上核酸内切酶EcoRI、蛋氨酸、内切酶BaomHI、天冬酰氨和甘氨酸对应的核苷酸序列；在其基因后依次设计上甘氨酸、核酸内切酶BglII、终止密码子和核酸内切酶PstI对应的核苷酸序列，采用克隆载体酶切后实现基因的串联EcoRIMetBamHIAsnGly——GlyBglIIStopPstIGAATTCATGGGATCCAACGGC——GGCAGATCTTGACTGCAG得到Tα1的n(2-8)串体，分别表示为Tα1①、Tα1②、Tα1③……Tα1其表达载体转化大肠杆菌得到基因工程菌；(2)对基因工程菌进行诱导表达；(3)基因工程菌的培养和高密度发酵；(4)融合蛋白的粗提、纯化和裂解：①所述粗提用高温骤冷方法；②所述纯化是层析方法；③所述裂解是用羟胺法进行裂解，裂解出天然Tα1单体。