一种重组鸡β-防御素的生产方法及工艺

摘要：

本发明公开了一种重组鸡β-防御素的生产方法及工艺：其主要目的是通过本发明获得低成本，高药效的抗菌药防御素，用来降低和减少目前广为应用的抗生素类药在动物肌体中形成的抗体和药物残留，从而保障人类的身体健康。本发明方法简便，工艺科学，所获得的防御素抗菌效果明显优于抗生素，可广泛应用于规模化生产和临床。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410023566.2

申请日期：2004-02-07

公开/公告号：CN1651576

公开/公告日：2005-08-10

主分类号：C12N15/62

申请/专利权人:山东信得药业有限公司

发明/设计人:赵建增;乔彦良;李朝阳;韩树盛

主申请人地址:262200山东省诸城市棉织街7号

国别省市代码:山东;37

权利要求：

1、一种重组鸡β-防御素的生产方法及工艺，主要用大肠杆菌重组鸡β-防御素融合蛋白，其特征在于：用RT-PCR技术从鸡上皮粘膜组织(舌头)总RNA中扩增鸡β-防御素gaIIinacin-3的编码基因，并在基因的两端引入适当的核酸内切酶识别位点，把鸡β-防御素编码基因插入到大肠杆菌表达载体PGX-6P-1的多克隆位点，使该基因置于谷胱甘肽S-转移酶(GST)编码基因的下游，并形成正确的阅读框架；于30-40°环境下，在培养基中加入0.1-2mMoI/LIPTG，振荡培养2-10小时，诱导融合蛋白基因表达，在SDS-PAGE电泳中可出现分子量约为34Kda的一种蛋白质：离心收集诱导后的重大肠杆菌，用超声细胞破碎仪把细菌破碎，高速离心收集包涵体，并用Triton缓冲液清洗；用含尿素的裂解缓冲液溶解包含体，然后用复性缓冲液稀释包涵体裂解液，使包涵体复性。