从酱油中提取用于转基因成分检测的DNA的方法
本发明的内容是从酱油中提取DNA，用于转基因成分的检测。与常规方法相比，本方法的特点是：在DNA提取过程中增加了样品的预处理过程，从而有效地去除酱油中的焦糖色素，减轻后续DNA提取过程的压力；通过增加三氯甲烷+异戊醇抽提的次数和溴代十六烷基三甲胺沉淀的时间，有效地去除蛋白质和多糖等杂质；将所提取的DNA溶解在30μL体积的去离子水中，取15μL用作一次PCR反应，以增加反应体系中DNA模板的浓度。此方法快速、简便、特异性强，效率高，适合于以转基因大豆为原料加工的酱油等深度加工的发酵食品中转基因成分的定性检测。
发明专利
CN200410020177.4
2004-07-28
CN1597983
2005-03-23
C12Q1/68
天津市农业科学院中心实验室
金红;赵昕;王永;程奕;郑贵忠
300192天津市南开区白堤路268号
天津市学苑有限责任专利代理事务所
解松凡
天津;12
1.从酱油中提取用于转基因成分检测的DNA的方法，它由下述步骤组成：(1)取酱油样品30mL，用1-3倍酱油样品体积的无水乙醇，放置在-20℃沉淀5-15分钟，沉淀用0.5-1.5倍酱油样品体积的pH＝8.0的0.1mol/LTris-HCl溶液溶解，用力摇匀，全部转移至100mL烧杯中，于磁力搅拌器上搅拌2小时，室温，12000转/分钟，离心10分钟，弃上清，沉淀用于DNA提取；(2)将步骤(1)获得的全部沉淀，加入10-15mL经65℃预热的溴代十六烷基三甲胺提取缓冲液，混匀，65℃水浴中保温1-1.5小时，期间每隔10分钟轻轻颠倒混匀一次；(3)取出静置冷却至20-25℃，12000转/分钟，离心12分钟，取上清；(4)加入与步骤(3)所得到的上清液等体积的体积比为24∶1的三氯甲烷∶异戊醇，缓慢颠倒摇匀5分钟，10000转/分钟，离心10分钟，取上清，再加入等体积24∶1的三氯甲烷∶异戊醇抽提一次，取上清；(5)加入2倍体积的溴代十六烷基三甲胺沉淀液，摇匀，20-25℃静置50-90分钟，12000转/分钟，离心10分钟，弃上清，留沉淀；(6)沉淀加入1.2mol/LNaCl溶液1mL，溶解沉淀，20-25℃静置5分钟，加入等体积24∶1的三氯甲烷∶异戊醇，颠倒摇匀1分钟，12000转/分钟，离心10分钟，取上清；(7)加入所取上清液1/10体积的3mol/L乙酸钠和等体积的4℃预冷异丙醇，缓慢混匀，4℃静置过夜，14000转/分钟，离心15分钟，弃上清，留沉淀；(8)用4℃预冷的400μL的70％乙醇洗涤沉淀，除去残留的乙醇，干燥沉淀，得到DNA沉淀；(9)加入25-35μL灭菌的去离子水，溶解从酱油中提取的DNA沉淀。