从大豆食用油中提取用于转基因成分检测的DNA的方法

摘要：

本发明的内容是从以大豆为原料的食用油中提取DNA，用于转基因成分的检测。与常规方法相比，本方法的特点是：在DNA提取过程中将含量极低的水溶性成分(包括部分已游离出来的DNA分子)从脂溶性油脂中充分游离出来；利用溴代十六烷基三甲胺提取液在室温使DNA分子从细胞中充分释放出来；利用等体积异丙醇和1/10体积的乙酸钠经长时间沉淀，使含量极低的小分子DNA充分沉淀下来；将所提取的DNA溶解在30μL体积的去离子水中，取15μL用作一次PCR反应，以增加反应体系中DNA模板的浓度。此方法快速、简便、特异性强，效率高，适用于以大豆为原料的深度加工食用油中转基因成分的定性检测。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410020176.X

申请日期：2004-07-28

公开/公告号：CN1597982

公开/公告日：2005-03-23

主分类号：C12Q1/68

申请/专利权人:天津市农业科学院中心实验室

发明/设计人:金红;赵昕;王永;程奕;郑贵忠

主申请人地址:300192天津市南开区白堤路268号

专利代理机构:天津市学苑有限责任专利代理事务所

代理人:解松凡

国别省市代码:天津;12

权利要求：

1.从以大豆为原料的食用油中提取用于转基因成分检测的DNA的方法，它由下述步骤组成：(1)取20-30mL样品，加入20-30mL正己烷或石油醚，20-25℃于磁力搅拌器上搅拌2～3小时；(2)加入40-60mLTE缓冲液，继续在20-25℃于磁力搅拌器上搅拌6-15小时，然后于4℃，12000转/分钟，离心15-20分钟，小心去除油相；(3)加入等体积的溴代十六烷基三甲胺提取缓冲液，混匀，20-25℃放置3～6小时，12000转/分钟，离心20分钟，取上清液；(4)加入与上清液等体积的异丙醇和上清液1/10体积的3mol/L乙酸钠，混匀，20-25℃静置6-15小时，12000转/分钟，离心20分钟，弃上清液，留沉淀；(5)加入1mLTE缓冲液溶解沉淀，加入等体积的体积比为24∶1的三氯甲烷∶异戊醇，缓慢颠倒摇匀5分钟，12000转/分钟，离心10分钟，取上清液；(6)加入1/10体积的3mol/L乙酸钠和等体积的4℃预冷的异丙醇，缓慢混匀，4℃静置6-15小时；(7)于4℃，14000转/分钟，离心15分钟，弃上清液；(8)用400μL4℃预冷的70％乙醇洗沉淀，除去残留的乙醇，干燥沉淀，得到DNA沉淀；(9)加入25-35μL灭菌的去离子水，溶解DNA沉淀。