从番茄酱中提取用于转基因成分检测的DNA的方法
本发明的内容是从番茄酱中提取DNA，用于转基因成分的检测。与常规方法相比，本方法的特点是：在DNA提取过程中增加了样品的预处理过程，从而使番茄酱沉淀物的pH值能满足后续提取过程的要求；通过增加三氯甲烷+异戊醇抽提的次数和溴代十六烷基三甲胺沉淀的时间，有效地去除蛋白质和多糖等杂质；将所提取的DNA溶解在30μL体积的去离子水中，取15μL用作一次PCR反应，以增加反应体系中DNA模板的浓度。此方法快速、简便、特异性强，效率高，适合番茄酱等深度加工食品中转基因成分的定性检测。
发明专利
CN200410020100.7
2004-07-23
CN1597981
2005-03-23
C12Q1/68
天津市农业科学院中心实验室
金红;赵昕;王永;程奕;郑贵忠
300192天津市南开区白堤路268号
天津市学苑有限责任专利代理事务所
解松凡
天津;12
1.从番茄酱中提取用于转基因成分检测的DNA的方法，它由下述步骤组成：(1)将番茄酱离心，沉淀，取2-4g沉淀，用1-3倍番茄酱体积的pH＝8.0的0.1mol/LTris-HCl的溶液洗涤3-5次；(2)将步骤(1)获得的沉淀2-4g，加入10-15mL经65℃预热的溴代十六烷基三甲胺提取缓冲液，混匀，65℃水浴1-1.5小时，期间每隔10分钟轻轻颠倒混匀一次；(3)取出静置冷却至20-25℃，于12000转/分钟，离心12分钟，取上清；(4)加入与步骤(3)所得到的上清液等体积的体积比为24∶1的三氯甲烷∶异戊醇，缓慢颠倒摇匀5分钟，10000转/分钟，离心10分钟，取上清，再加入等体积的体积比为24∶1的三氯甲烷∶异戊醇抽提一次，取上清；(5)加入2倍体积的溴代十六烷基三甲胺沉淀液，摇匀，20-25℃静置50-90分钟，12000转/分钟，离心10分钟，弃上清；(6)沉淀加入1.2mol/LNaCl溶液1mL，溶解沉淀，20-25℃静置5分钟，加入等体积的体积比为24∶1的三氯甲烷∶异戊醇，颠倒摇匀1分钟，12000转/分钟，离心10分钟，取上清；(7)加入所取上清液1/10体积的3mol/L乙酸钠和等体积的4℃预冷异丙醇，缓慢混匀，4℃静置过夜，14000转/分钟，离心15分钟，弃上清；(8)用4℃预冷400μL体积百分比为70％的乙醇洗涤沉淀，除去残留的乙醇，干燥沉淀，得到DNA沉淀；(9)加入25-35μL经灭菌的去离子水，溶解从番茄酱中提取的DNA沉淀。