噬菌体多肽的荧光蛋白标记体系的建立方法

摘要：

本发明涉及一种噬菌体多肽融合荧光蛋白表达载体的构建方法，属于分子药理学技术领域。本发明首先对荧光蛋白基因进行改造，用限制性内切酶对克隆载体上的荧光蛋白基因进行双酶切，与同样经双酶切处理的表达载体进行连接，获得重组原核荧光蛋白表达载体。然后将噬菌体多肽和与其连接的衣壳蛋白部分编码基因共同扩增，再将其连接在经双酶切的重组原核荧光蛋白基因的氨基端，构建成噬菌体多肽融合荧光蛋白表达载体。本发明提供的噬菌体肽融合荧光蛋白表达载体大大降低了实验的成本和实验时间，不仅适合体外检测，也适合于活体体内检测。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410017983.6

申请日期：2004-04-27

公开/公告号：CN1570118

公开/公告日：2005-01-26

主分类号：C12N15/65

申请/专利权人:华东师范大学

发明/设计人:杜冰;钱旻;张小平;范春妹;周忠良;章平;郁萌

主申请人地址:200062上海市中山北路3663号

专利代理机构:上海德昭专利事务所

代理人:程宗德

国别省市代码:上海;31

权利要求：

1、一种噬菌体多肽的荧光蛋白标记体系的建立方法，其特征在于包括以下步骤：第一步：对荧光蛋白进行改造，使其在氨基端获得新的酶切位点，用限制性内切酶对克隆载体上的荧光蛋白基因进行双酶切，回收目标荧光蛋白基因后，与同样经双酶切处理的表达载体进行连接，再转化到感受态大肠杆菌中，挑选阳性克隆，提取重组原核荧光蛋白表达载体；第二步：根据噬菌体基因设计适用于丝状噬菌体的PCR引物，将噬菌体多肽和与其连接的衣壳蛋白共同扩增，再将其连接在经双酶切的重组原核荧光蛋白基因的氨基端，建立成噬菌体多肽的荧光蛋白标记体系。