一种定量检测微量循环DNA的方法

摘要：

本发明属血清学检测技术领域，具体涉及一种基于荧光染料的微量循环DNA的定量检测技术。本发明通过染料与纯化的DNA结合后所产生的荧光强度分析，定量出外周血中游离DNA的含量。本发明可精确检测到低至纳克水平的微量循环DNA，具有快速、简便、敏感、精确的特点。通过对一定人群和肿瘤患者循环DNA的测定，验证了本发明具备了较高的可靠性、灵敏性和准确性。本发明可用于大规模肿瘤高危人群筛查、肿瘤的早期诊断以及疗效预后的动态观察。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410016779.2

申请日期：2004-03-05

公开/公告号：CN1560277

公开/公告日：2005-01-05

主分类号：C12Q1/68

申请/专利权人:复旦大学

发明/设计人:高海峰;屠红

主申请人地址:200433上海市邯郸路220号

专利代理机构:上海正旦专利代理有限公司

代理人:包兆宜

国别省市代码:上海;31

权利要求：

1、一种定量检测微量循环DNA的方法，其特征是基于荧光的DNA染色定量检测方法，包括下述步骤，(1)分离、保存血清/血浆，取外周静脉血，置试管或抗凝管中，室温静置，3000转/分钟离心，取上层血清再离心，吸上层血清，直接检测或低温保存至使用；(2)抽提血清/血浆中游离DNA，取血清，加2倍体积裂解液DL及蛋白酶K，混匀后置65℃水浴消化，加2倍血清/血浆体积的异丙醇，混匀后12000转/分钟离心，使液体通过试剂盒的吸附柱后，柱中加入缓冲液W1，静置，12000转/分钟离心弃液体，重复W1液洗柱，弃去液体，再离心，收集纯化的DNA；(3)取上述纯化DNA与荧光染料混匀点样于透明薄膜上反应，置紫外投射仪中数码成像，用SMARTVIEW分析软件对荧光信号密度定量，制订标准曲线，计算血清/血浆中的游离DNA的水平。