一种植物金属硫蛋白双聚体的制备方法

摘要：

一种植物金属硫蛋白双聚体的制备方法其特征包括：利用基因工程技术构建植物金属硫蛋白双聚体基因序列，选择开发性质粒pQe系列，并在特选大肠杆菌(Rosetta gami)中来表达植物金属硫蛋白双聚体。将植物金属硫蛋白双聚体工程菌在LB培养液中进行培养。然后离心收集菌体，用缓冲液悬浮菌体，破碎菌体，再离心，上清液与镍琼脂糖在4℃中进行亲和吸附一小时，然后上柱洗脱、收集馏分、脱盐后即可得到植物金属硫蛋白双聚体。本发明提供一种制备低成本、高产量、高纯度的植物金属硫蛋白双聚体的方法。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410013635.1

申请日期：2004-03-22

公开/公告号：CN1609229

公开/公告日：2005-04-27

主分类号：C12P21/02

申请/专利权人:东北林业大学%安志刚%祖元刚

发明/设计人:安志刚;祖元刚;付玉杰

主申请人地址:150040黑龙江省哈尔滨市动力区和兴路26号

国别省市代码:黑龙江;23

权利要求：

1.一种植物金属硫蛋白双聚体的制备方法，其特征包括：(1)利用基因工程技术构建植物金属硫蛋白双聚体基因序列，选择开发性质粒pQe系列，其中的六个组氨酸连续基因序列与植物金属硫蛋白双聚体基因序列相融合并在特选大肠杆菌菌种(Rosettagami)中来表达植物金属硫蛋白双聚体。(2)植物金属硫蛋白双聚体工程菌在LB培养液中于常规温度培养18-20小时，稀释菌在常规温度培养至OD0.6-1.2，迅速冷却至16-28℃后加入IPTG16-28℃中诱导培养18-24小时。然后离心收集菌体，用缓冲液悬浮菌体，破碎菌体，再离心，上清液与镍琼脂糖在4℃中进行亲和吸附一小时，然后上柱洗脱、收集馏分、脱盐后即可得到植物金属硫蛋白双聚体。