利用农杆菌介导的培育籼稻转基因植株的方法
本发明属于植物转基因技术领域。公开了一种利用农杆菌介导的培育转基因籼稻植株的新方法。筛选了几个专用培养基，对四个有代表性籼稻如明恢63、珍汕97B、中419和W9864S等品种的外植体进行了基因转化试验，获得了较高效率的转基因小植株。转化率分别为明恢63达23.4％，珍汕97B达9.3％，中419达8.5％以及W9864S达22.2％。
发明专利
CN200410013344.2
2004-06-24
CN1712537
2005-12-28
C12N15/82
华中农业大学
林拥军;张启发
430070湖北省武汉市洪山区狮子山街1号
武汉宇晨专利事务所
王敏锋
湖北;42
1、一种利用农杆菌介导的培育转基因籼稻植株的方法，它包括以下步骤：第一步：愈伤组织的诱导将籼稻的成熟胚、幼胚或花药作外植体，先用75％酒精清洗所述的外植体1分钟，再用0.15％的升汞浸泡外植体10～15分钟，无菌水洗涤，然后将灭过菌的外植体接入诱导培养基，在26℃下暗培养，诱导出愈伤组织；第二步：愈伤组织的继代培养从第一步得到的愈伤组织中挑取活力旺盛、表面干燥的愈伤组织转入继代培养基，置于26℃暗培养条件下，继代培养20天；第三步：愈伤组织的预培养将继代培养后的愈伤组织切成约0.2厘米大小的于上组织块，接入预培养培养基，于26℃下暗培养4天；第四步：愈伤组织与农杆菌的共培养将预培养后得到的小块愈伤组织加入农杆菌工作菌液浸泡30min，然后接入共培养培养基，于19～20℃下暗培养3天；第五步：抗性愈伤组织的筛选将共培养得到的愈伤组织用无菌水洗净，加入含400mg/L羧苄青霉素或头孢霉素的无菌水溶液浸泡15min，用无菌滤纸吸干后接入筛选培养基，于26℃下暗培养，每两周继代1次，共筛选继代3次，直到长出所需的抗性愈伤；第六步：抗性愈伤组织的预分化将第五步得到的抗性愈伤组织接入预分化培养基，于26℃下暗培养7天；第七步：抗性愈伤组织再生植株经预分化后的抗性愈伤组织转入分化培养基，25℃，2000Lux，光照培养，再生转基因植株。