一种食用菌液体菌种深层发酵工艺
本发明涉及一种食用菌液体菌种深层发酵工艺，使用母种培养基进行母种制备，将获得的母种植入一级摇瓶中的摇瓶培养基中进行菌种制备，将获得的菌种接种到种子罐内的一级发酵培养基中进行一级发酵培养，然后将一级发酵培养后获得的一级菌种接种到深层发酵罐内的深层发酵培养基中进行深层发酵培养，最终获得食用菌液体菌种；本发明具有生产周期短，菌种活力强，菌球直径小，菌球密度大的优点。
发明专利
CN200410001084.7
2004-02-03
CN1651568
2005-08-10
C12N1/14
李勇
李勇;王延林
101316北京市顺义区北石槽镇商业街18号
北京;11
1、一种食用菌液体菌种深层发酵工艺，其特征在于：使用母种培养基进行母种制备，将获得的母种植入一级摇瓶中的摇瓶培养基中进行菌种制备，将获得的菌种接种到种子罐内的一级发酵培养基中进行一级发酵培养，然后将一级发酵培养后获得的一级菌种接种到深层发酵罐内的深层发酵培养基中进行深层发酵培养，最终获得食用菌液体菌种；在所述的母种制备过程中选用母种培养基A或母种培养基B或母种培养基C中的一种进行母种制备；所述母种培养基A由下述原料的重量比调配而成：葡萄糖2酵母膏0.5磷酸二氢钾0.1硫酸镁0.1琼脂2水100；所述母种培养基B由下述原料的重量比调配而成：棉子皮细粉50玉米粉49.5蛋白胨0.5水100；所述母种培养基C由下述原料的重量比调配而成：麸皮38阔叶木屑60葡萄糖1.5蛋白胨0.5水100；所述母种制备步骤如下：A、将上述母种培养基原料精确称重，充分溶解，搅拌均匀，采用氢氧化钠或盐酸液调节PH至6.5，配制成母种培养基；B、将所述母种培养基装入制备试管，每支试管装量为8～10克；C、将所述制备试管放入手提高压锅内加热，经排汽后达到0.108Mpa时维持30分钟灭菌；D、当温度降至60℃时，将制备试管内的母种培养基调整成斜面，该斜面长度为80～100毫米，逐渐冷却至室温；E、采用无菌操作，将子实体组织分离后移植到所述试管内的母种培养基斜面上，于25℃-26℃闭光培养7～10天，选取生长健壮正常的尖端纯菌丝进行再次无菌操作移植，将该纯菌丝移植到另一试管内的所述母种培养基斜面上，经25℃～27℃培养7-10天，即成母代专用母种；在所述的菌种制备过程中选用摇瓶培养基A或摇瓶培养基B或摇瓶培养基C中的一种进行菌种制备；所述摇瓶培养基A由下述原料的重量比调配而成：马铃薯20葡萄糖2蛋白胨0.2酵母粉0.5磷酸二氢钾0.1硫酸镁0.06琼脂0.1水100；所述摇瓶培养基B由下述原料的重量比调配而成：葡萄糖3玉米粉1豆饼粉2酵母粉1磷酸二氢钾0.1硫酸镁0.05琼脂0.1水100；所述摇瓶培养基C由下述原料的重量比调配而成：马铃薯20麸皮5蛋白胨0.5蔗糖1葡萄糖1磷酸二氢钾0.2硫酸镁0.06维生素B10.01水100；所述菌种制备步骤如下：A、按以上配方精确称量，将马铃薯去皮切片，玉米粉、麸皮、豆饼粉搅拌均匀加五倍水加热至95～100℃浸提30～45分钟，用纱布过滤取滤液加入其它成份不断搅拌使其溶解，并调节PH至6.5，制成摇瓶培养基；B、取500毫升规格的三角瓶作一级摇瓶，该摇瓶内装入所述摇瓶培养基，每瓶装量100毫升，另取5000毫升规格的三角瓶作二级摇瓶，该摇瓶内装入所述摇瓶培养基，每瓶装量1000毫升；C、将所述摇瓶置于高压锅内加热，经排汽定压0.108Mpa时维持30分钟灭菌；D、取20毫升无菌水无菌操作注入所述制备试管中的专用母种中并捣碎，置于无菌匀浆机内以5000转/分钟转速匀浆4分钟，制成匀浆菌种；E、将所述匀浆菌种10毫升无菌操作接入一级摇瓶；F、将所述一级摇瓶置于往复式摇瓶机上，在25℃～27℃条件下，以90～100次/分钟频率往复振荡培养5～7天；G、由一级摇瓶无菌接入二级摇瓶，将所述二级摇瓶置于往复式摇瓶机上，在25℃～27℃条件下，以100～120次/分钟频率往复振荡培养5～7天，制备成菌种；在所述的一级发酵培养过程中选用一级发酵培养基A或一级发酵培养基B或一级发酵培养基C中的一种进行一级发酵培养；所述一级发酵培养基A由下述原料的重量比调配而成：葡萄糖2土豆淀粉2酵母粉1奶粉2蛋白胨0.12磷酸二氢钾0.15硫酸镁0.01氯化钠0.1硫酸锌0.017氯化钙0.004琼脂0.1植物油0.15维生素B10.005维生素B20.005水100；所述一级发酵培养基B由下述原料的重量比调配而成：葡萄糖1蛋白胨0.5酵母粉0.12磷酸二氢钾0.15硫酸镁0.05琼脂0.1植物油0.1微量元素液0.1水100；所述一级发酵培养基C由下述原料的重量比调配而成：土豆10葡萄糖1.2麦麸4蛋白胨0.2蔗糖1磷酸二氢钾0.15硫酸镁0.05泡敌0.03维生素B10.01水100；所述一级发酵培养步骤如下：A、使用深层发酵培养机，检查该培养机的各管道是否严密完好；B、调定汽压0.14Mpa，活蒸汽消毒灭菌2小时，密闭阀门；C、将所述一级发酵培养基按配方加热溶解或浸提，经过滤后加入一级发酵罐内，加水定容至标定液位，取样检测并调节PH至6.5；D、加热消毒灭菌，维持压力0.1Mpa(温度121℃)，35分钟后，降压冷却；E、一级发酵罐通入无菌空气，维持罐压≥0.02Mpa；F、罐温降至28℃时，无菌操作，接入所述二级摇瓶制备成的菌种；G、在温度25℃下培养36小时，加大通气量培养48～60小时，取样检测合格后备用，完成菌种的一级发酵培养；在所述的深层发酵培养过程中选用深层发酵培养基A或深层发酵培养基B或深层发酵培养基C中的一种进行深层发酵培养；所述深层发酵培养基A由下述原料的重量比调配而成：麸皮5葡萄糖3蛋白胨0.2磷酸二氢钾0.03硫酸镁0.05植物油0.15水100；所述深层发酵培养基B由下述原料的重量比调配而成：玉米粉2酵母膏0.2葡萄糖1磷酸二氢钾0.1硫酸镁0.05氯化钠0.05琼脂0.1植物油0.15水100；所述深层发酵培养基C由下述原料的重量比调配而成：葡萄糖1.2土豆10麦麸4蛋白胨0.2蔗糖1磷酸二氢钾0.15硫酸镁0.05维生素B10.01泡敌0.03水100；所述深层发酵培养步骤如下：A、使用深层发酵培养机，检查该培养机的各管道是否严密完好；B、启动加热按扭，蒸汽压力至0.14Mpa时活蒸汽消毒灭菌2小时后关闭阀门；C、按上述培养基配方称取物料，其中固形物料加水后加热浸提，过滤取汁，其中可溶性物料用热水溶解与所述滤汁合并后加入培养机的深层发酵罐内，加水定容，调节PH至6.5；D、启动加热按扭进行蒸汽消毒灭菌，维持罐压0.108Mpa35分钟，冷却；E、罐温降至28℃～30℃，关闭冷却水阀，开启接种阀门，用压差法接入经一级发酵培养的菌种；F、调节深层发酵罐温度至26℃，培养36小时后加大通气量培养36～48小时，获得食用菌液体菌种。