一种用于大规模培养细胞的微载体

摘要：

本发明涉及一种用于大规模培养细胞的微载体。该微载体是将壳聚糖和明胶按下述步骤制得：首先将壳聚糖醋酸水溶液和明胶水溶液按一定比例混合均匀，制备成复合的壳聚糖—明胶水溶液；然后在搅拌下加入一定司班的矿物油，形成稳定的壳聚糖—明胶油包水剂；再加入戊二醛交联剂固化；用100/280μm孔径的筛网过滤，收集实心微载体，或是用450/600μm孔径的筛网过滤，再冻干，收集多孔微载体；最后用甘氨酸处理以封闭未反应的醛基；再用NaOH处理以去除残留的醋酸，即可得到该微载体。该微载体既有助于细胞的粘附，又能长期维持细胞功能。而且，本发明提供的方法可根据需要在较宽的范围内控制微载体的各项参数，成本低廉，适宜大规模培养，有利于工业化生产。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410000630.5

申请日期：2004-01-13

公开/公告号：CN1641017

公开/公告日：2005-07-20

主分类号：C12N5/02

申请/专利权人:中国科学院动物研究所

发明/设计人:李克国;丰美福;汪蕴;苗振川;徐大勇

主申请人地址:100080北京市海淀区中关村北四环西路25号

专利代理机构:北京泛华伟业知识产权代理有限公司

代理人:王凤华

国别省市代码:北京;11

权利要求：

1、一种用于大规模培养细胞的微载体，其为如下方法得到：1)配制1～5w/v％壳聚糖醋酸水溶液和1～5w/v％明胶水溶液，将二者按1∶3～3∶1体积比于50～70℃混合均匀，制备成复合的壳聚糖-明胶水溶液；2)以100～500rpm的速率机械搅拌，将步骤1)得到的壳聚糖-明胶水溶液加入3～10倍体积含0.5～5w/v％司班的矿物油中，搅拌5～30分钟，形成稳定的壳聚糖-明胶油包水剂；3)向步骤2)得到的壳聚糖-明胶油包水剂中边以100～500rpm的速率搅拌边加入0.1～10w/v％戊二醛，继续搅拌0.5～5小时，再静止0.5～5小时，得到用戊二醛作为交联剂固化的水相；4)用100/280μm孔径的筛网过滤步骤3)得到的用戊二醛作为交联剂固化的水相，收集直径为100～280μm的微载体，得到的实心微载体用表面活性剂Tween、石油醚或丙酮洗涤，以去除载体表面的油相；5)将得到的微载体用0.01～0.5M甘氨酸处理2～30小时，以封闭未反应的醛基；再用0.1～10w/v％NaOH处理0.5～10小时，以去除残留的醋酸；最后用蒸馏水洗涤至中性，高压灭菌后保存于磷酸缓冲液中，得到用于大规模培养细胞的微载体。