一种能够使转基因植物自主剔除标记基因的方法

摘要：

本发明属于植物基因工程领域。利用λ噬菌体attP特异重组位点以及其重组酶基因INT，构建植物转化载体pAMF，它含有重组酶基因INT、目的基因和选择标记基因，INT由地米塞松特异诱导型启动子驱动，和选择标记基因共同位于两个attP位点之间，目的基因位于attP位点外侧。通过农杆菌转化或其他方法获得该载体的转化植株或愈伤。转化植株自交纯化后，地米塞松诱导INT表达特异切除两attP位点间的标记基因和本身，自交后从其分离后代中选无标记基因植株。或利用地米塞松诱导愈伤使INT表达，特异切除两位点间的INT本身和标记基因，切除标记基因的愈伤无标记基因抗性，选取非抗性愈伤诱导成苗即为无标记基因的转基因植株，最后经过PCR或Southern分子检测确认。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200310111415.8

申请日期：2003-11-19

公开/公告号：CN1618961

公开/公告日：2005-05-25

主分类号：C12N15/09

申请/专利权人:华中农业大学

发明/设计人:叶志彪;李汉霞;张俊红;卢永恩;欧阳波

主申请人地址:430070湖北省武汉市洪山区狮子山街

专利代理机构:武汉宇晨专利事务所

代理人:王敏锋

国别省市代码:湖北;42

权利要求：

1、一种能够使转基因植物自主剔除标记基因的方法，其特征在于，利用λ噬菌体识别序列(attP)特异重组位点及其重组酶基因(INT)，构建植物转化载体pAMF，通过根癌农杆菌或其他植物遗传转化方法获得该载体的转化植株或愈伤组织。转化植株自交选择获得纯合，经地米塞松诱导后，从其自交分离后代中选择剔除标记基因的植株；获得的愈伤可通过地米塞松诱导，选取非抗性愈伤诱导成苗获得无标记基因转基因植株；通过PCR或Southern杂交分子鉴定方法进一步确认。