TPA衍生物的基因工程菌破碎技术

摘要：

本发明公开了一种对生产组织纤溶酶原激活剂或其衍生物的大肠杆菌进行破碎的方法，它包括步骤：(a)在表达条件下，培养大肠杆菌，所述大肠杆菌含有：表达组织纤溶酶原激活剂或其衍生物的第一质粒，和表达λ噬菌体裂解基因S-RRz的第二质粒；(b)收集大肠杆菌菌体；(c)将大肠杆菌菌体悬浮于含0.5-10mM细胞膜渗透诱导剂的水溶液中；(d)用超声波法或高压匀浆法破碎步骤(c)中的菌体，获得破碎产物。本发明方法可快速、高效地破碎大肠杆菌。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200310108420.3

申请日期：2003-11-05

公开/公告号：CN1614009

公开/公告日：2005-05-11

主分类号：C12N1/21

申请/专利权人:上海中科伍佰豪生物工程有限公司

发明/设计人:张毅;褚仲梅;杨胜利;陆坚峰;刘成;屈贤铭

主申请人地址:200233上海市漕宝路500号

专利代理机构:上海专利商标事务所有限公司

代理人:徐迅

国别省市代码:上海;31

权利要求：

1.一种对生产组织纤溶酶原激活剂或其衍生物的大肠杆菌进行破碎的方法，其特征在于，它包括步骤：(a)在表达条件下，培养生产组织纤溶酶原激活剂或其衍生物的大肠杆菌，所述大肠杆菌含有：表达组织纤溶酶原激活剂或其衍生物的第一质粒，和表达λ噬菌体裂解基因S-RRz的第二质粒，其中裂解基因S-RRz与表达调控序列可操作地相连，从而表达出组织纤溶酶原激活剂或其衍生物，以及裂解基因S-RRz的表达产物；(b)收集大肠杆菌菌体；(c)将大肠杆菌菌体悬浮于含0.5-10mM细胞膜渗透诱导剂的水溶液中，在37±3℃下放置10-60分钟，其中所述水溶液pH为7.5-9，且所述的细胞膜渗透诱导剂选自下组：EDTA、EGTA或其混合物；(d)用超声波法或高压匀浆法破碎步骤(c)中的菌体，获得破碎产物。