人源甲硫氨酰氨肽酶1的表达方法及它在寻找抗肿瘤药物中应用

摘要：

本发明公开了一种人源I型甲硫氨酰氨肽酶HsMetAP1在原核生物大肠杆菌的表达系统，并纯化得到活性蛋白并找到了其活性关键结构的要求；本发明公开了建立HsMetAP1的高通量筛选模型，应用该模型筛选得到活性化合物，找到了活性化合物具有抑制肿瘤细胞生长的活性，以及人源I型甲硫氨酰氨肽酶与肿瘤之间的关系。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200310108025.5

申请日期：2003-10-20

公开/公告号：CN1609221

公开/公告日：2005-04-27

主分类号：C12N15/52

申请/专利权人:中国科学院上海药物研究所

发明/设计人:李佳;南发俊;叶其壮;李静雅;罗群力;陈玲玲;崔永梅

主申请人地址:201203上海市浦东张江高科技园区祖冲之路555号

专利代理机构:上海开祺专利代理有限公司

代理人:费开逵%季良赳

国别省市代码:上海;31

权利要求：

1、一种人源I型甲硫氨酰肽酶(HsMetAP1)及它的缺失突变(HsMetAP1Δ1-66，HsMetAP1Δ1-135)的表达方法，包括如下步骤：(1)设计不同的正、反向引物；(2)以人源膀胱细胞ECV304的总RNA为模板用RT-PCR方法得该细胞的cDNA，利用上述设计的引物和得到的cDNA用PCR方法得到HsMetAP1的编码序列；(3)用内切酶EcoRI和SalI双酶切质粒载体pGEX-KG用T4连接酶连接、纯化得重组质粒pGEX-KG/HsMetAP1；(4)将上述重组质粒转化入大肠杆菌表达，经提取、纯化得活性蛋白HsMetAP1或HsMetAP1Δ1-66，HsMetAP1Δ1-135。