检测靶序列的方法和组合物

摘要：

本发明涉及采用连接和扩增技术检测靶核酸序列存在与否(或定量靶核酸序列)的方法和试剂盒。本发明还涉及使用可寻址部分和标记探针的方法、试剂和试剂盒。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN03824619.8

申请日期：2003-09-19

公开/公告号：CN1688718

公开/公告日：2005-10-26

主分类号：C12Q1/68

申请/专利权人:阿普里拉股份有限公司

发明/设计人:A·爱丁

主申请人地址:美国加利福尼亚州

专利代理机构:上海专利商标事务所有限公司

代理人:徐 迅

国别省市代码:美国;US

权利要求：

1.一种检测样品中至少一种靶核酸序列的方法，其特征在于，所述方法包括：形成一种含有样品和各靶核酸序列连接探针组的连接反应组合物，所述探针组包括(a)至少一种第一探针，其含有靶特异性部分和5’引物特异性部分，其中所述5’引物特异性部分含有一序列；和(b)至少一种第二探针，其含有靶特异性部分和3’引物特异性部分，其中所述3’引物特异性部分含有一序列；其中，各组中的探针当在互补靶核酸序列上毗邻彼此杂交时适合连接在一起，且各探针组中的一个探针还含有位于引物特异性部分与靶特异性部分之间的可寻址部分，其中所述可寻址部分含有一序列；使所述连接反应组合物通过至少一轮连接以形成测试组合物，其中，毗邻的杂交互补探针彼此连接以形成一连接产物，其含有5’引物特异性部分、靶特异性部分、可寻址部分和3’引物特异性部分；形成一扩增反应组合物，其中含有：测试组合物；聚合酶；标记的探针，其中所述标记的探针当其不与互补序列杂交时具有可检测的第一信号值；其中所述标记的探针含有可寻址部分的序列或含有与可寻址部分的序列互补的序列；和至少一个引物组，所述引物组含有(i)至少一种第一引物，其含有连接产物5’引物特异性部分的序列，和(ii)至少一种第二引物，其含有与该连接产物3’引物特异性部分的序列互补的序列；使所述扩增反应组合物经历至少一次扩增反应；以及检测扩增反应期间或之后至少一种可检测的第二信号值，其中第一可检测信号值与第二可检测信号值之间有阈值差异表明存在靶核酸序列，而其中第一可检测信号值与第二可检测信号值之间无阈值差异表明不存在靶核酸序列。