一种筛选和建立小鼠发育相关基因突变ES细胞库的方法
本发明提供了一种利用基因捕获技术建立大规模位点明确的突变小鼠胚胎干细胞(ES)库的方法和筛选鉴定突变基因与小鼠胚胎发育之间关系的方法。本发明通过对基因捕获载体系统进行了优化，构建了新的基因捕获载体，建立了突变ES细胞克隆。结合突变基因位点的鉴定方法、鉴定突变基因在小鼠胚胎发育中的表达及时空特异性的方法，以及突变ES细胞转变为小鼠的方法，本发明的ES细胞库可用于发现新基因、建立基因突变小鼠模型和研究基因与小鼠个体发育的关系及其功能。
发明专利
CN03142075.3
2003-08-06
CN1580249
2005-02-16
C12N5/10
上海南方模式生物科技发展有限公司%上海第二医科大学附属瑞金医院%医科大学健康科学中心
王铸钢;党素英;费俭;孙霞;麻孙恺
201203上海市张江科技工业区蔡伦路88号2栋4楼
上海专利商标事务所
徐迅
上海;31
1.一种建立突变胚胎干细胞库的方法，其特征在于，包括步骤：(a)将基因捕获载体导入胚胎干细胞，所述的基因捕获载体从5′至3′的结构是：SA-ST-IRES-EGFP-pA-Prom-Anti-SD式中，SA是RNA剪接的受体序列；ST是串联终止密码子；IRES是内部核糖体进入位点；EGFP是增强型绿色荧光蛋白基因；pA是polyA序列；Prom是选自下组的启动子：CMV、PGK、LTP；Anti是选自下组的抗性基因：Neo、Puro，Hygro，Pac；SD是RNA剪接的供体序列；(b)筛选存活的、带有筛选基因的胚胎干细胞；(c)合并存活的胚胎干细胞，获得突变胚胎干细胞库。