一种不需要分离DNA的反转录聚合酶链反应方法

摘要：

本发明提供一种不需要分离DNA的反转录聚合酶链反应方法，即设计引物使以RNA为模板的RT-PCR扩增产物的解链温度比包含内涵子的以DNA为模板的扩增产物的解链温度低1-25℃，以克服现有RT-PCR方法难以排除样品中的DNA对以RNA为原始模板的RT-PCR的干扰的缺陷。一方面简化甚至省略了RNA与DNA的分离步骤，另一方面由于完全克服了DNA扩增产物的干扰，可使用简单的方法来检测反转录PCR扩增产物，能在分子生物学研究和临床高通量快速诊断中普遍应用。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN03141989.5

申请日期：2003-07-31

公开/公告号：CN1580273

公开/公告日：2005-02-16

主分类号：C12P19/34

申请/专利权人:徐定邦%徐文慧

发明/设计人:徐定邦;朱德芬;谢文凯;徐文慧

主申请人地址:200071上海市永兴路58弄2号603室

国别省市代码:上海;31

权利要求：

1.一种不受DNA干扰的反转录聚合酶链式反应方法，其步骤依次包括：(1)在反转录酶催化下，依据RNA链合成DNA模板；(2)DNA模板变性解链；(3)引物与模板退火；(4)在DNA聚合酶催化下延伸合成互补DNA链；按步骤(2)-(4)循环进行合成反应，其特征在于设计引物使以RNA为模板的RT-PCR扩增产物的解链温度比包含内涵子的以DNA为模板的扩增产物的解链温度低1-25℃。