一种使皮肤成纤维细胞永生化的方法

摘要：

本发明属于遗传工程的细胞修饰、融合技术领域，涉及一种使皮肤成纤维细胞永生化的方法。特征是选取猿猴病毒40大T抗原LT和人端粒酶催化亚单位hTERT对皮肤成纤维细胞进行联合转染，最终得到与正常成纤维细胞生物学行为接近、性状相对稳定的永生化皮肤成纤维细胞系。该细胞的获得可以使其成为皮肤研究的标准细胞或组织工程皮肤的种子细胞来源之一，同时有助于细胞永生化研究的深入发展。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN03134542.5

申请日期：2003-09-02

公开/公告号：CN1590539

公开/公告日：2005-03-09

主分类号：C12N5/08

申请/专利权人:中国人民解放军第四军医大学口腔医学院

发明/设计人:金岩;王新文

主申请人地址:710032陕西省西安市康复路7号

专利代理机构:中国科学院西安专利中心

代理人:任越

国别省市代码:陕西;61

权利要求：

1、一种使皮肤成纤维细胞永生化的方法，其特征在于：将猿猴病毒40大T抗原LT的互补脱氧核糖核酸cDNA和带有荧光蛋白表达基因的人端粒酶催化亚单位hTERT的cDNA，共同转染皮肤成纤维细胞，以建立永生化细胞系，包括以下步骤：步骤1：培养原代皮肤成纤维细胞；步骤2：分别用猿猴病毒40大T抗原LT、人端粒酶催化亚单位hTERT转染成纤维细胞，并进行转染后鉴定；步骤3：带有荧光蛋白表达基因和端粒酶催化亚单位hTERTcDNA的载体pIRES2-EGFP-hTERT的构建；步骤4：LT、hTERT共转染成纤维细胞：取已转染LT的细胞进行pIRES2-EGFP-hTERT的转染，利用荧光显微镜分离获得阳性克隆，并进行扩大培养。