快速检测海藻施万氏菌的试剂盒及检测方法
本发明提供一种快速检测海藻施万氏菌的试剂盒,试剂包括:(a)DNA提取试剂:含缓冲试剂A和细胞裂解试剂B,(b)PCR反应试剂:包括反应预混试剂C和反应引物试剂D,试剂C含有10倍PCR反应缓冲液、热聚合酶和灭菌双蒸水,试剂D:包括特异引物VP<sub>03</sub>,特指5‘<sup>-</sup>agccgcaagagcctatcaagga;VP<sub>04</sub>特指5‘<sup>-</sup>atccttattcaccggagtcttg、dNTP及MgCl<sub>2</sub>,(c)电泳和显色试剂。本发明还提供一种使用这种试剂盒快速测检海藻施万氏菌的方法,其优点是快速、准确。
发明专利
CN02114725.6
2002-01-11
CN1363685
2002-08-14
C12Q1/04
中国科学院南海海洋研究所
陈偿;胡超群;沈琪;任春华
510260广东省广州市新港西路164号
广州科粤专利代理有限责任公司
赖汉光
广东;44
权利要求书1.一种快速检测海藻施万氏菌的试剂盒,其特征是试剂包括:(a)DNA提取试剂:含缓冲试剂A和细胞裂解试剂B,试剂A含有NaCl、三羟基甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸和曲拉通X-100,它们的浓度分别为:0.1-0.3M、1-100mM pH8.0、0.1-10mM pH8.0和0-20%;试剂B含有溶菌酶和三羟基甲基氨基甲烷,浓度分别为1-10mg/ml和1-100mMpH8.0;(b)PCR反应试剂:包括反应预混试剂C和反应引物试剂D,试剂C含有10倍PCR反应缓冲液、热聚合酶和灭菌双蒸水,含量分别为2.5-5.0μl、0.5-2.5个单位和18-35.5μl;试剂D:包括特异引物对VP03和VP04、dNTP及MgCl2,含量分别为0.2-3μM和0.2-3μM、20-200μM及0.5-10mM;特异引物VP03特指5‘-agccgcaagagcctatcaagga;VP04特指5‘-atccttattcaccggagtcttg;(c)电泳和显色试剂,包括试剂E和试剂F,试剂E:为50倍电泳缓冲液,含三羟基甲基氨基甲烷-乙酸和乙二胺四乙酸,浓度分别为0.04M和0.001M;试剂F:0.8-2%琼脂糖和0.5-20μg/ml溴乙锭。