利用分枝杆菌深度脱除化石燃料中有机硫的方法
本发明公开了一种利用分枝杆菌深度脱除化石燃料中有机硫的方法,该方法包括(1)菌种选择,(2)斜面培养,(3)一级种子培养,(4)扩大培养,(5)发酵罐培养,(6)收集菌体,(7)处理样品,(8)分离样品,(9)样品检测等步骤;具有方法简便,温度要求宽泛(25-50℃),耗能低,脱硫率高等特点,在大气污染治理方面具有很大的应用前景。
发明专利
CN02110375.5
2002-05-20
CN1379084
2002-11-13
C12N1/20
山东大学
许平;李福利;马翠卿;曲音波
250100山东省济南市山大南路27号
济南三达专利事务所
许德山
山东;37
权利要求书1.一种利用分枝杆菌深度脱除化石燃料中有机硫的方法,其步骤顺序如下:(1)菌种选择:选用分枝杆菌中古的分枝杆菌(Mycobacterium goodii)DSM44492,草分枝杆菌(Mycobacterium phlei)ATCC 354,草分枝杆菌(Mycobacteriumphlei)ATCC 11728,分枝杆菌(Mycobacterium sp.)ATCC 9823,分枝杆菌(Mycobacteriumsp.)ATCC 11761之一;(2)斜面培养:将上述菌株接种于含有1.5~2.0%的琼脂糖并加有0.1~2.0mmol/LDBT的MAM固体斜面培养基上,25~50℃培养菌体20~30小时;(3)一级种子培养:将步骤(2)培养的菌株,无菌条件下用接种环接1~4环于20~100mL含有0.1~2.0mmol/L DBT的MAM液体培养基中,25~50℃条件下,在摇床上振荡培养20~30小时,制得一级种子;(4)扩大培养:以5%(体积比)接种量,接一级种子于300~1000mL含有0.1~2.0mmol/L DBT的MAM液体培养基中,25~50℃条件下,在摇床上振荡培养20~30小时,制得二级种子;(5)发酵罐培养:以5%(体积比)接种量,接二级种子于1.8~8L含有0.1~2.0mmol/L DBT的MAM液体培养基中,25~50℃条件下,培养20~30小时;(6)收集菌体:在5000转/分条件下离心5~8分钟,收集步骤(5)制得的菌体,并用生理盐水洗涤2~3次;再将菌体溶于120mL的20~100mmol/L的磷酸钾缓冲液中,调节pH至7.5,使菌体的浓度达到10~30克干细胞/升,即制得生物催化剂,在-20℃储存,备用;(7)处理样品:加入12~40mL含硫化石燃料样品或10~30克固体含硫化石燃料样品,以3~10∶1的比例,将步骤(6)中的生物催化剂与化石燃料混合,在25~50℃条件下,180转/分钟振荡24~30小时;(8)分离样品:以10,000转/分离心5~10分钟,分离步骤(7)中处理的样品,得到油相;(9)样品检测:待步骤(8)中的样品分离完之后,取1~5μL样品进样,测定化石燃料中残留的硫含量,得出脱除率。