基因重组制备人肌红蛋白的方法

摘要：

本发明为基因重组制备人肌红蛋白的方法，包括RT－PCR技术制备人肌红蛋白基因(cDNA)的过程、重组表达质粒的构建过程、重组体导入宿主大肠杆菌、外源基因在转化体表达的过程和表达产物纯化鉴定的过程，重组体所用的质粒为pET－21a(+)，所用的大肠杆菌选用BL21DE3菌株。该方法在插入基因片段两端设计了双酶切位点的人工接头，保证了正确的插入方向，使重组体的构建可一次完成，操作更快速、方便、简单，相对现有技术大大缩短了制备生产的时间；表达产物正确、特异、稳定、高效，纯化的人肌红蛋白能与抗人肌红蛋白单抗特异反应，证明纯化产物保持了其天然活性，因而，本发明所述的方法建立了人肌红蛋白基因的大肠杆菌表达株，为制备人肌红蛋白及其单抗奠定了基础。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN02110359.3

申请日期：2002-04-27

公开/公告号：CN1377970

公开/公告日：2002-11-06

主分类号：C12N15/63

申请/专利权人:王桂琴%陈明%史沁卫

发明/设计人:王桂琴;陈明;史沁卫

主申请人地址:030002山西省太原市新建路56号山西科技报宿舍1－201号

专利代理机构:山西太原科卫专利事务所

代理人:朱源

国别省市代码:山西;14

权利要求：

权利要求书1、一种基因重组制备人肌红蛋白的方法，包括从组织抽提总RNA、总RNA反转录成cDNA、加入上下游引物进行PCR扩增步骤的RT-PCR技术制备人肌红蛋白基因(cDNA)的过程、包括将提纯的DNA片段、载体质粒双酶切、酶切产物纯化连接步骤的重组表达质粒的构建过程、重组体导入宿主大肠杆菌、外源基因在转化体表达的过程和表达产物纯化鉴定的过程，其特征为：——其基因制备过程中的扩增参数为：93-95℃1-3min→60-68℃30-60s→68-72℃30-60s，该过程进行35次循环——重组体所用的质粒为pET-21a(+)——所用的宿主大肠杆菌选用BL21DE3菌株。