具有生物活性的重组中国人白细胞介素－12及其制备方法
本发明涉及一种具有生物活性的重组中国人白细胞介素－12及其制备方法，其特征在于该蛋白基因表达所采用IL－12P35和P40两个亚基cDNA基因是从中国人外周血细胞克隆的，所克隆两个亚基基因采用内部核糖体切入位点(IRES)连接，其方法是包括基因的克隆，真核表达载体的构建，宿主细胞转染，细胞株的培养及其表达产物的纯化，该产品具有广泛的抗肿瘤，抗病毒，抗真菌，抗寄生虫等生物活性，为感染性疾病及肿瘤的治疗提供了有效的候选药物。
发明专利
CN02100866.3
2002-02-04
CN1373221
2002-10-09
C12N15/24
中国预防医学科学院病毒学研究所
焦宏远;詹美云
100052北京市宣武区迎新街100号病毒所
北京三高永信专利事务所
吴凤英
北京;11
权利要求书1、一种具有生物活性的重组中国人白细胞介素-12，其特征在于该蛋白基因表达所采用IL-12P35和P40两个亚基cDNA基因是从中国人外周血细胞克隆的，所克隆两个亚基基因采用内部核糖体切入位点(IRES)连接，克隆的中国人白细胞介素-12P35CDNA的核苷酸及推导的氨基酸序列为，1 AG AAA GCA AGA GAC CAG AGT CCC GGG AAA GTC CTG CCG CGC CTC GGG 4748 ACA ATT ATA AAA ATG TGG CCC CCT GGG TCA GCC TCC CAG CCA CCG CCC 951 M W P P G S A S Q P P P 1296 TCA CCT GCC GCG GCC ACA GGT CTG CAT CCA GCG GCT CGC CCT GTG TCC 14313 S P A A A T G L H P A A R P V S 28144 CTG CAG TGC CGG CTC AGC ATG TGT CCA GCG CGC AGC CTC CTC CTT GTG 19129 L Q C R L S M C P A R S L L L V 44192 GCT ACC CTG GTC CTC CTG GAC CAC CTC AGT TTG GCC AGA AAC CTC CCC 23945 A T L V L L D H L S L A R N L P 60240 GTG GCC ACT CCA GAC CCA GGA ATG TTC CCA TGC CTT CAC CAC TCC CAA 28761 V A T P D P G M F P C L H H S Q 76288 AAC CTG CTG AGG GCC GTC AGC AAC ATG CTC CAG AAG GCC AGA CAA ACT 33577 N L L R A V S N M L Q K A R Q T 92336 CTA GAA TTT TAC CCT TGC ACT TCT GAA GAG ATT GAT CAT GAA GAT ATC 38393 L E F Y P C T S E E I D H E D I 108384 ACA AAA GAT AAA ACC AGC ACA GTG GAG GCC TGT TTA CCA TTG GAA TTA 431109 T K D K T S T V E A C L P L E L 124432 ACC AAG AAT GAG AGT TGC CTA AAT TCC AGA GAG ACC TCT TTC ATA ACT 479125 T K N E S C L N S R E T S F I T 140480 AAT GGG AGT TGC CTG GCC TCC AGA AAG ACC TCT TTT ATG ATG GCC CTG 527141 N G S C L A S R K T S F M M A L 156528 TGC CTT AGT AGT ATT TAT GAA GAC TTG AAG ATG TAC CAG GTG GAG TTC 575157 C L S S I Y E D L K M Y Q V E F 172576 AAG ACC ATG AAT GCA AAG CTT CTG ATG GAT CCT AAG AGG CAG ATC TTT 623173 K T M N A K L L M D P K R Q I F 188624 CTA GAT CAA AAC ATG CTG GCA GTT ATT GAT GAG CTG ATG CAG GCC CTG 671189 L D Q N M L A V I D E L M Q A L 204672 AAT TTC AAC AGT GAG ACT GTG CCA CAA AAA TCC TCC CTT GAA GAA CCG 719205 N F N S E T V P Q K S S L E E P 2201720 GAT TTT TAT AAA ACT AAA ATC AAG CTC TGC ATA CTT CTT CAT GCT TTC 767221 D F Y K T K I K L C I L L H A F 236768 AGA ATT CGG GCA GTG ACT ATT GAT AGA GTG ATG AGC TAT CTG AAT GCT 815237 R I R A V T I D R V M S Y L N A 252816 TCC TAA AA 823253 S * 254中国人白细胞介素-12P40cDNA的核苷酸及推导的氨基酸序列：1 AGC AAG ATG TGT CAC CAG CAG TTG GTC ATC TCT TGG TTT TCC CTG GTT 481 M C H Q Q L V I S W F S L V 1449 TTT CTG GCA TCT CCC CTC GTG GCC ATA TGG GAA CTG AAG AAA GAT GTT 9615 F L A S P L V A I W E L K K D V 3097 TAT GTC GTA GAA TTG GAT TGG TAT CCG GAT GCC CCT GGA GAA ATG GTG 14431 Y V V E L D W Y P D A P G E M V 46145 GTC CTC ACC TGT GAC ACC CCT GAA GAA GAT GGT ATC ACC TGG ACC TTG 19247 V L T C D T P E E D G I T W T L 62193 GAC CAG AGC AGT GAG GTC TTA GGC TCT GGC AAA ACC CTG ACC ATC CAA 24063 D Q S S E V L G S G K T L T I Q 78241 GTC AAA GAG TTT GGA GAT GCT GGC CAG TAG ACC TGT CAC AAA GGA GGC 28879 V K E F G D A G Q Y T C H K G G 94289 GAG GTT CTA AGC CAT TCG CTC CTG CTG CTT CAC AAA AAG GAA GAT GGA 33695 E V L S H S L L L L H K K E D G 110337 ATT TGG TCC ACT GAT ATT TTA AAG GAC CAG AAA GAA CCC AAA AAT AAG 381111 I W S T D I L K D Q K E P K N K 126385 ACC TTT CTA AGA TGC GAG GCC AAG AAT TAT TCT GGA CGT TTC ACC TGC 432127 T F L R C E A K N Y S G R F T C 142433 TGG TGG CTG ACG ACA ATC AGT ACT GAT TTG ACA TTC AGT GTC AAA AGC 480143 W W L T T I S T D L T F S V K S 158481 AGC AGA GGC TCT TCT GAC CCC CAA GGG GTG ACG TGC GGA GCT GCT ACA 528159 S R G S S D P Q G V T C G A A T 174529 CTC TCT GCA GAG AGA GTC AGA GGG GAC AAC AAG GAG TAT GAG TAC TCA 576175 L S A E R V R G D N K E Y E Y S 190577 GTG GAG TGC GAG GAG GAC AGT GCC TGC CCA GCT GCT GAG GAG AGT CTG 624191 V E C Q E D S A C P A A E E S L 206625 CCC ATT GAG GTC ATG GTG GAT GCC GTT CAC AAG GTC AAG TAT GAA AAC 672207 P I E V M V D A V H K L K Y E N 222673 TAC ACC AGC AGC TTC TTC AGC AGG GAC ATC ATC AAA CCT GAC CCA CCC 720223 Y T S S F F I R D I I K P D P P 238721 AAG AAC TTG CAG CTG AAG CCA TTA AAG AAT TCT CGG CAG GTG GAG GTC 768239 K N L Q L K P L K N S R Q V E V 254769 AGC TGG GAG TAC CCT GAC ACC TGG AGT ACT CCA CAT TCC TAC TTC TCC 816255 S W E Y P D T W S T P H S Y F S 2703817 CTG ACA TTC TGC GTT CAG GTC CAG GGC AAG AGC AAG AGA GAA AAG AAA 864271 L T F C V Q V Q G K S K R E K K 286865 GAT AGA GGC TTC ACG GAC AAG ACC TCA GCC ACG GTC ATC TGC CGC AAA 912287 D R G F T D K T S A T V I C R K 302913 AAT GCC AGC ATT AGC GTG CGG GCC CAG GAC CGC TAC TAT AGC TCA TCT 960303 N A S I S V R A Q D R Y Y S S S 318961 TGG ACC GAA TGG GCA TCT GTG CCC TGC AGT TAG GTT CTG ATC CAG GA 1008319 W S E W A S V P C S * 329注：方格内碱基为基因突变点4