收集以及使用细胞核mRNA的方法
常规基因表达系统和纯化方法目标集中于整个细胞中存在的mRNA。因此，其结果显示为新转录mRNA以及消化mRNA的总和。因此，以前难以在mRNA正在消化的情况下检测新mRNA的表达。而且，当已经存在大量mRNA时，难以检测mRNA量的微小变化，因此敏感性低。已证实新合成的mRNA位于细胞核中，集中于这一事实开发了一种新方法。将细胞捕获在膜上，并用细胞膜透化溶液如NP-40处理，由此增加细胞膜的通透性。在洗去胞质后，用细胞溶解液溶解细胞核，然后由因此获得的溶液成功回收mRNA。该方法非常简单，仅需要2-3分钟的额外时间，但可以处理大量的样品，并且该方法可并入到自动化系统中。因此，该方法有可能成为处理基因表达分析样品的标准方法，特别是对于RT-PCR。
发明专利
CN01821394.4
2001-10-25
CN1606621
2005-04-13
C12N15/10
日立化学研究中心%日立化成工业株式会社
M·米特苏哈施
美国加利福尼亚州
中国专利代理(香港)有限公司
孟凡宏
美国;US
1.一种检测细胞基因表达的方法，该方法包括：将细胞捕获在滤膜或膜上；使所述细胞与细胞膜透化溶液接触，以增加细胞膜的通透性；清洗细胞质；使洗去细胞质的细胞与细胞溶解溶液接触，以溶解细胞核，由此获得细胞核溶液；由所述细胞核溶液回收RNA；根据回收的RNA量确定细胞的基因表达。