快速检测痕量有机磷和氨基甲酸酯农药的方法
快速检测痕量有机磷和氨基甲酸酯农药的方法。解决现有酶抑制法检测灵敏度低、准确度差的问题。本发明方法包括植物酯酶原酶液的制备、pH8.0缓冲液及酶溶液的制备、酶的固定、基质液和显色液制备、检测方法、结果判定(目测)等过程。本发明所使用的农药检测器是用聚苯乙烯微孔塑料条制成，塑料条上设有3个孔，中间为对照孔C，两边为样品孔S<sub>1</sub>和S<sub>2</sub>，每孔加酶溶液0.015～0.03ml，使内壁表面均被固定有植物酯酶，室温下或4℃冰箱自然凉干后，用无离子水冲洗，凉干制成。本发明开创性地使用植物酯酶代替常规方法使用的动物chE。不仅取材方便、制备简单容易、廉价，而且反应灵敏，有效地解决了杂质干扰问题。
发明专利
CN01144343.X
2001-12-17
CN1366065
2002-08-28
C12Q1/44
农业部环境保护科研监测所
李治祥;黄士忠;王继军;黄永春
300191天津市南开区复康路31号
天津市佳盟有限责任专利代理事务所
侯力
天津;12
权利要求书1.一种用植物酯酶抑制技术快速检测痕量有机磷和氨基甲酸酯农药的方法，其特征是该方法按以下步骤完成：第一、植物酯酶原酶液的制备：植物种子、根、茎、叶、花、果实均可作植物酶源，特别是面粉，取面粉，按重量体积比1∶5比例加入蒸馏水，经振荡、离心，上清液过滤，滤液作为原酶液保存备用；第二、pH8.0缓冲液的制备：取46.8ml 0.1N NaOH溶液，加入50ml 0.1MKH2PO4溶液中，再加入适量牛血清白蛋白和戊二醛，加水至100ml；第三、酶溶液：取前述原酶液加入缓冲液中，使原酶液浓度为10～20％，充分混合均匀；第四、酶的固定：取聚苯乙烯微孔塑料条，塑料条上设有3个孔，中间为对照孔C，两边为样品孔S1和S2，每孔加酶溶液0.015～0.03ml，内壁表面均被固定有植物酯酶，室温下或4℃冰箱自然凉干后，用无离子水冲洗，凉干，室温干燥避光保存；第五、基质液和显色液制备：基质液：取醋酸-1-萘酯1.25mg置于试剂瓶中，加入基质溶解液1ml，振摇至基质完全溶解备用；显色液：取固兰B盐1.56mg置于试剂瓶中，加水1ml，振摇至固兰B盐全部溶解，备用；第六、检测：将待测样品液加入到样品孔S1和S2中，每孔各加2滴，使样品液与酶充分反应后甩掉样品液，再向每孔各加入2滴无离子水洗1次甩掉，然后向样品孔S1、S2和对照孔C各加1滴基质液和显色液，反应显色；1