山楂SOD的提取方法
本发明涉及一种SOD酶的提取技术。本发明的山楂SOD粗酶可以通过硫酸铵沉淀法或膜分离法获得，其主要工艺流程为山楂果经组织捣碎后，离心，将粗提液用30％硫酸铵沉淀，采用膜系统过滤获得滤液；获得的滤液用90％硫酸铵沉淀，将沉淀溶于缓冲液中，然后SephadexG－25脱盐，获得粗酶提取液；将脱盐后的粗酶提取液加入到Sephadex G－100柱中进行柱层析，采用全自动分布收集系统收集洗脱液，合并SOD活力高的收集液；进一步透析，冷冻干燥，获得高酶活SOD粗酶制剂。实验证明，本发明具有原料廉价易得、酶活性高、回收率高的优点。
发明专利
CN01136564.1
2001-10-18
CN1341713
2002-03-27
C12N9/08
北京利农生物技术研究中心
王琦;梅汝鸿;梁华荣;付学池;刘艳芳
100094北京市海淀区圆明园西路2号
北京农林水专利代理有限公司
∴显伦
北京;11
权利要求书1、一种硫酸铵沉淀法提取山楂SOD酶，其特征在于提取步骤为：(1)原料预处理新鲜山楂果，通过组织捣碎机捣碎成浆，置于4000-6000rpm离心机离心10-30分钟，弃沉淀残渣，获得上清液作为粗提液；(2)30％硫酸铵沉淀将粗提液加入硫酸铵，使粗提液中硫酸铵达到30％饱和度，在室温(23-25℃)下搅拌55分钟，采用膜系统过滤获得滤液；(3)90％硫酸铵沉淀在30％硫酸铵沉淀后的滤液中，加入硫酸铵使其饱和度达到90％，在室温下搅拌60分钟，置于10000-15000rpm离心机离心20-40分钟，将沉淀溶于最小量的5mM pH7.8磷酸缓冲液中(含2mM EDTA)，然后用上述缓冲液和SephadexG-25脱盐；(4)Sephadex G-100柱层析Sephadex G-100柱，预先用pH7.8、5mM的磷酸钾缓冲液平衡；将脱盐后的粗酶提取液加入到柱中，并用上述缓冲液洗脱，采用全自动分布收集系统收集洗脱液，合并SOD活力高的收集液。