以Taq酶对DNA和RNA病原进行同步PCR检测的方法

摘要：

本发明涉及一种基因检测技术，具体地说，涉及一种Taq酶对DNA和RNA病原进行同步PCR快速扩增检测的方法。主要是采用蛋白质裂解试剂和煮沸法同步提取病毒核酸DNA和RNA，利用Taq DNA聚合酶本身的聚合酶活性和逆转录活性，以上述过程制备的病毒核酸为模板直接进行PCR扩增，得到所需的各种目的核酸片断；经过电泳或杂交进行基因检测。本发明简化了提取核酸模板和逆转录的过程，节省了试剂成本，大大缩短了检测时间，减少了污染机会，为DNA病毒和RNA病毒的多重PCR技术检测提供一种新方法，不仅适用于多种疾病病原基因的同步检测，更能满足临床实际的需要。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN01133528.9

申请日期：2001-09-30

公开/公告号：CN1346893

公开/公告日：2002-05-01

主分类号：C12Q1/68

申请/专利权人:武汉大学

发明/设计人:王业富;庞代文;沈钧涛

主申请人地址:430072湖北省武汉市武昌珞珈山

专利代理机构:武汉科宏专利事务所

代理人:黄瑞棠%王敏锋

国别省市代码:湖北;42

权利要求：

权利要求书1、一种以Taq酶对DNA和RNA病原进行同步PCR检测的方法，其特征在于：①蛋白质裂解试剂组成为：1％～10％的十二烷基硫酸钠(SDS)、2～20％NP-40、1～10％吐温-20表面活性剂与Tris或磷酸缓冲液的两两组合，再加入RNA酶抑制剂焦碳酸二乙酯(DEPC)；②采用蛋白质裂解试剂和煮沸法同步提取病毒核酸DNA和RNA；③利用Taq DNA聚合酶本身的聚合酶活性和逆转录活性，以上述过程制备的病毒核酸为模板直接进行PCR扩增，得到所需的核酸片断；④得到核酸片断后，经过电泳或杂交进行基因检测；⑤检验流程为模板制备、PCR扩增、检测。