基因的等温滚环复制与限制性内切酶检测方法及其试剂盒

摘要：

本发明公开了一种基因的等温滚环复制与限制性内切酶检测方法及其试剂盒，其主要内容是，在试管内用特定DNA探针与目的基因杂交，用DNA连接酶把探针连接成环之后，以滚环方式复制、扩增DNA模板，然后通过限制性内切酶将扩增的DNA降解成一定长度的片段，最后通过电泳来检测目的基因是否被扩增。与通用的聚合酶链式反应(PCR)相比，用本方法检测特定的基因序列不需要价格昂贵的DNA扩增仪，可以直接检测DNA和RNA分子，具有简单、方便、经济、灵敏度高、特异性强等优点。可用于包括动物、植物和微生物的基因检测和基因扩增。试剂盒根据检测对象的性质(动物、植物、真菌、细菌等)提供不同的试剂，令检测更方便。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN01133433.9

申请日期：2001-11-07

公开/公告号：CN1384208

公开/公告日：2002-12-11

主分类号：C12Q1/68

申请/专利权人:哈尔滨工业大学糖业研究院

发明/设计人:葛莘

主申请人地址:150086黑龙江省哈尔滨市南岗区学府路333号

专利代理机构:哈尔滨市哈科专利事务所有限责任公司

代理人:刘娅

国别省市代码:黑龙江;23

权利要求：

权利要求书1、一种基因的等温滚环复制与限制性内切酶检测方法，命名为RCA-RED，其基本步骤包括：(1)、将DNA探针与待检样品的DNA或RNA混合，使DNA探针与目的基因杂交。该引物探针上有特定的限制性内切酶切割位点；(2)、加入DNA连接酶，使DNA探针连接成环状；(3)、加入DNA聚合酶和复制引物，令其以滚环方式复制并合成双链DNA；(4)、加入限制性内切酶，将复制的DNA切割成特定长度的片段；(5)、通过电泳，如平板琼脂糖凝胶电泳，垂直聚丙烯酰胺电泳，毛细管电泳等，检查特定长度的DNA片段；