CpG岛甲基化检测试剂盒及其应用
本发明涉及基因检测技术，具体是指用于肿瘤诊断、去甲基化药物筛选的CpG岛甲基化检测试剂盒及其应用。本试剂盒主要包含引物、提取模板DNA的药物、基因组修饰用药物、DNA纯化用药物、特异性MSP－PCR反应体系和阳性和阴性对照标本。本发明利用人类基因的基因序列，根据碱基错配原理设计引物，它们可选自细胞周期上二个基因即P<sub>15</sub><sup>INK4B</sup>，P<sub>16</sub><sup>INK4A</sup>基因，胰癌基因CPG，蛋白激酶相关蛋白基因CPG，乳腺癌基因2CPG，急性白血病相关基因，基因调节因子3基因，基因调节因子27基因，GTP激酶相关蛋白27基因，GTP激酶相关蛋白基因27B，GTP激酶相关蛋白基因2L引物中的任何一种，不同引物就组成检测不同疾病的试剂盒。本发明试剂盒准确、灵敏度高。可简便地检测对象CpG岛有无甲基化和筛选去甲基化药物。能广泛用于癌症的诊断和相关药物的筛选，具有良好的经济效益和社会效益。
发明专利
CN01129967.3
2001-11-27
CN1357636
2002-07-10
C12Q1/68
暨南大学
郭秀枝
510632广东省广州市天河区石牌
广州粤高专利代理有限公司
何燕玲
广东;44
权利要求书1、CpG岛甲基化检测试剂盒，其特征在于它包含有下列药物：(1)引物利用人类基因组的基因序列，根据碱基错配原理，引物选自细胞周期上二个基因即P15INK4B，P16DNK4A基因，胰癌基因CPG，蛋白激酶相关蛋白基因CPG，乳腺癌基因2CPG，急性白血病相关基因，基因调节因子3基因，基因调节因子27基因，GTP激酶相关蛋白27基因，GTP激酶相关蛋白基因27B，GTP激酶相关蛋白基因2L引物中的任何一种；(2)提取模板DNA的药物①内含200～400μg/ml的蛋白酶K的DNA提取液，②饱和酚/氯仿/异戊醇体系，它们的体积比为20～25∶20～25∶1，③醋酸钠，④淋巴细胞分层液；(3)基因组修饰用药物：①硅精，②氢醌，③亚硫酸氢钠，④矿物油；(4)基因组修饰后的DNA纯化用药物①DNA纯化用DEAE树脂，②异丙醇；(5)特异性MSP-PCR反应体系①甲基化PCR缓冲液，10×buffer，②四种核苷酸即dNTP，③MgCl2，④耐高温聚合酶即Taq酶；(6)阳性和阴性对照标本①阳性标本甲基化Raji细胞，②阴性标本非甲基化HL60细胞。