cDNA文库基础上cDNA消减杂交差异显示方法

摘要：

cDNA文库基础上cDNA消减杂交差异显示方法，是一种分子生物学基因克隆分析方法，属于分子生物学领域。它是利用cDNA文库载体的限制性内切酶酶切位点，酶切选代表制备两文库扩增子，进行两文库扩增子间的双向一轮消减杂交，在各自一轮差异产物间进行双向二轮消减杂交，两轮差异产物标记同位素后引入mRNA差异显示技术进行差异分析。该方法为cDNA文库提供了新的应用前景，为克隆低丰度弱差异的基因提供了有效的手段。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN01129429.9

申请日期：2001-06-19

公开/公告号：CN1392267

公开/公告日：2003-01-22

主分类号：C12Q1/68

申请/专利权人:北京市肿瘤防治研究所

发明/设计人:吕有勇;李勇;崔建涛

主申请人地址:100034北京市西城区大红罗厂街1号

专利代理机构:北京市蕾波医药卫生专利代理事务所

代理人:刘榜美

国别省市代码:北京;11

权利要求：

权利要求书一种cDNA文库基础上cDNA消减杂交差异显示方法(SHDD)，建立在cDNA文库基础上，并进一步结合了现有方法cDNA代表性差异分析方法(cDNA RDA)与mRNA差异显示方法(mRNA DD)各自的优点，其特征在于它利用cDNA文库丰富的cDNA信息及载体具有的限制性内切酶酶切位点，以合适的内切酶酶切释放出插入序列片段作为代表，在此基础上开展差异分析；并以两DNA(或cDNA)样本分别作为检测DNA和驱动DNA进行双向一轮消减杂交，获得各自一轮杂交差异产物；分别以两样本各自一轮杂交差异产物制备检测DNA和驱动DNA，在此基础上进一步开展双向二轮消减杂交获得各自二轮消减杂交差异产物；两轮差异产物标记同位素后进行测序胶差异显示。