具有高度延伸专一性的DNA低温循环延伸反应方法

摘要：

本发明提供一种具有高度延伸专一性的DNA低温循环延伸反应的方法，该方法采用低温DNA扩增体系，使用短于25bp的引物得到有用的特异性产物，供测序或其他分析之需，本发明可用于大规模高保真PCR和自动荧光DNA循环测序反应。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN01117603.2

申请日期：2001-04-30

公开/公告号：CN1384203

公开/公告日：2002-12-11

主分类号：C12P19/34

申请/专利权人:香港科技创业股份有限公司

发明/设计人:洪国藩;杨永杰;朱嘉

主申请人地址:香港中环干诺道中68号华懋广场第二期5楼A室

专利代理机构:上海智信专利代理有限公司

代理人:费开逵

国别省市代码:香港;HK

权利要求：

权利要求书1.一种延伸专一性的DNA低温循环延伸方法包括a.在反应体系中含有低浓度的甘油或乙二醇，存在有一种模板，一对长度短于或长于25bp的引物和一种野生型或修饰后的中等热稳定DNA聚合酶的即用型反应混合物，当温度在变性温度(~70℃)和退火温度(约37℃)之间循环时DNA聚合酶能重复延伸引物，得到序列特异性扩增产物；b.扩增双链DNA片断直接用于循环测序反应，该循环测序反应包括加入大大过量引物、四种标准荧光标记的ddNTP终止物、一种中等热稳定的DNA聚合酶、适量四种ddNTP混合物及含有15％(V/V)甘油的缓冲体系，在80℃以下重复环引物延伸反应若干次，得荧光标记ddNTP终止的不同长度延伸产物。