仔猪大肠杆菌K88ac－ST<sub>1</sub>－LT<sub>B</sub>三价基因工程菌苗及制备方法
仔猪大肠杆菌K88ac－ST<sub>1</sub>－LT<sub>B</sub>三价基因工程菌苗及制备方法，其特征是采用聚合酶链反应和基因突变技术，从大肠杆菌C83902质粒中扩增出K88ac、ST<sub>1</sub>和LT<sub>B</sub>基因，通过分离、纯化、内切酶酶切、连接和转化，构建了含K88ac－ST<sub>1</sub>－LT<sub>B</sub>融合基因表达载体的基因工程菌株BL21(DE3)(pXKST3LT5)，该菌株表达的有效抗原成份在菌体内部，能达到缓慢连续释放的作用，且解决了ST<sub>1</sub>的抗原性难题，克服了目前市场上使用的大肠杆菌菌苗的缺点，从而达到更有效地预防由产肠毒素性大肠杆菌引起的仔猪黄、白痢的目的。
发明专利
CN01113943.9
2001-05-11
CN1385522
2002-12-18
C12N1/21
卫广森%许崇波
卫广森;许崇波
111000辽宁省辽阳市太子河区南驻路12号
沈阳智龙专利事务所
崔红梅
辽宁;21
权利要求书1.一种用于预防仔猪大肠杆菌腹泻的K88ac-ST1-LTB三价基因工程菌苗，其特征是基因工程菌株BL21(DE3)(pXKST3LT5)：1)受体菌为大肠杆菌BL21(DE3)2)重组表达质粒pXKST3LT5-Ori--PT7--K88ac gene--ST1-ST1-ST1 gene--LTB gene--Kangene-它含有大肠杆菌复制子Ori，PT7是T7 RNA聚合酶/启动子表达系统，受体菌BL21(DE3)，外源目的基因为K88ac、ST1和LTB基因，抗性筛选基因为卡那霉素Kan基因；K88ac保护性抗原基因是K88ac全基因的第250位至第579位，该基因表达的抗原包含了K88ac全抗原的绝大部分抗原决定簇；ST1基因为3｀端含有2个编码半胱氨酸残基Cys的TGT被突变成编码丝氨酸残基Ser的AGT的突变基因，串联在一起的3个ST突变基因所表达的ST1突变肠毒素已失去了ST1肠毒素本身的生物学毒性；LTB抗原基因为具有良好的抗原性的全基因，基因工程菌株BL21(DE3)(pXKST3LT5)表达的有效抗原K88ac-ST1-LTB融合蛋白以包含体形式存在于菌体内部，且K88ac和LTB在保留原有抗原性基础上，赋予了原本不具有抗原性的ST1具有了抗原性。