抗菌肽啤酒酵母的制备与应用
柞蚕抗菌肽具有广谱杀菌作用。根据天然抗菌肽A的1－11位氨基酸序列及抗菌肽D的12－37位氨基酸序列，设计抗菌肽AD基因，克隆于啤酒酵母中表达。经优化培养基配方和培养条件，在发酵罐中达到高密度培养及高效表达(5000单位/毫升)。将抗菌肽酵母制品按5000单位/kg添加于仔猪饲料中，或以60－100单位/日·头添加于雏鸡饮水中，能预防与治疗禽畜腹泻，可代替部分抗生素作为饲料添加剂。
发明专利
CN01112274.9
2001-04-03
CN1322814
2001-11-21
C12N1/19
深圳市艺鹏生物工程有限公司
黄自然;黄亚东;郑青;姚汝华
518031广东省深圳市深南中路1027号新城大厦西座9楼
长春科宇专利代理有限责任公司
李恩庆%马守忠
广东;44
权利要求书1、抗菌肽啤酒酵母的制备，其特征在于根据柞蚕天然抗菌肽基因设计抗菌肽AD氨基酸序列及其基因用DNA合成仪合成含82个碱基的F1多聚脱氧核糖核苷酸片段和含78个碱基F2多聚脱氧核糖核苷酸片段，它们之间有20个碱基互补；设计合成引物1:5′GGATCCGTATGAAATGGAAG 3′引物2:3′TCATTATTCTTAAGCAGGCTG 5′通过F1、F2和引物1、2，用PCR(聚合酶链反应)方法合成具有134个碱基对的抗菌肽AD基因；将抗菌肽AD基因与pCRTM2.1质粒(T载体)用T4DNA连接酶连接构建成pCRCAD重组质粒；用pCRCAD重组质粒转化大肠杆菌JM109，用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)和溴氯吲哚半乳糖苷(X-gal)筛选获得含pCRCAD重组质粒pCRCAD的转化子；用限制性核酸内切酶BamHⅠ和SalⅠ酶切得到抗菌肽AD基因(cecropin AD1gene)片段，该基因片段具有134碱基(bp)；将抗菌肽AD基因片段与穿梭质粒pCLWA2用T4DNA连接酶连接构建成含抗菌肽AD基因的重组表达质粒pCAD；用锂盐法将重组表达质粒转化于亮氨酸缺陷型啤酒酵母AB103；用缺亮氨酸培养基筛选抗菌肽AD酵母工程菌株；将抗菌肽AD酵母工程菌株在培养基培养得到抗菌肽AD酵母制品。2