从螺旋藻中提取含铁超氧化物歧化酶的方法

引用

摘要：

本发明公开了一种从螺旋藻中提取含铁氧化物歧化酶的方法，藻体经超声波破碎、硫酸铵分级沉淀、ＤＥＡＥ—２３柱层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ—７５凝胶过滤提取含铁超氧化物歧化酶，具有工艺简便，Ｆｅ—ＤＯＳ纯化到均一程度，并具有较高的比活。Ｆｅ—ＳＯＤ应用于医药、化妆品、保健品和食品等许多领域。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN01107444.2

申请日期：2001-01-13

公开/公告号：CN1298943

公开/公告日：2001-06-13

主分类号：C12N9/02

申请/专利权人:广东梅县梅雁蓝藻有限公司

发明/设计人:李江平;曾文辉;钱凯先

主申请人地址:514759广东省梅县雁洋镇

国别省市代码:广东;44

权利要求：

1、一种从螺旋藻中提取含铁超氧化物歧化酶的方法，其特征在于：(1)取鲜螺旋藻沥水后，悬浮于抽提缓冲液中，鲜藻与抽提缓冲液的比例为1∶2～5(重量与体积比)，冰浴下用超声波破碎细胞(2～5kw,10～30KHZ，超2～6min2次，间歇4～6min)，抽提液在8000～12000g(离心力)离心30～60min，取上清液，得粗提液；(2)根据粗提液的体积，按30～70％饱和度计算<chemistry-cwu><chem><cml><molecule>(NH<sb>4</sb>)<sb>2</sb>SO<sb>4</sb></molecule></cml></chem></chemistry-cwu>用量，将<chemistry-cwu><chem><cml><molecule>(NH<sb>4</sb>)<sb>2</sb>SO<sb>4</sb></molecule></cml></chem></chemistry-cwu>缓慢加入粗提液中，充分搅拌，静置过夜，将沉淀液在8000～12000g离心40～80min，取上清液，将上清液调至高饱和度；(3)酶液在3～8mM,PH值为7.5～8.0的磷酸缓冲液中透析12～30h后，上样到预先用3～8mM,PH值为7.5～8.0的磷酸缓冲液平衡好的DEAE-23柱上，上样速度为15～45ml/h，用磷酸缓冲液进行线性梯度洗脱，收集洗脱峰区酶液；(4)将收集液用PEG20000浓缩，以10～30ml/h的速度上样到预先用3～8mM,PH值为7.5～8.0的磷酸缓冲液平衡好的Sephadex G-75柱上，并用磷酸缓冲液进行线性梯度洗脱，收集洗脱峰区酶液，以上操作在4～10℃进行。

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