家蚕基因工程植酸酶工业化感染控制方法

摘要：

本发明涉及一种家蚕基因工程植酸酶工业化感染控制方法，应用重组BMNPV载体－家蚕宿主表达系统，在蚕体内繁殖产生目标物植酸酶蛋白，以以下的手段实现病毒的工业化感染及生长控制：A)扩增的重组BmNPV滴度标定达10⁶PFU；注射接种深度为皮下2mm；B)蛹体用乙醇浸泡，蚕幼虫用70％乙醇棉球体表消毒；接种后蚕体喷洒氯霉素；C)接种后严格控制温度在25±1℃；一般收蚕时间：病蚕幼虫接种后4－5天；病蛹接种后5－6天。采用本发明的方法可使蚕体取得较高(≥300U/克)且稳定的目标植酸酶表达量。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN01107392.6

申请日期：2001-04-30

公开/公告号：CN1384191

公开/公告日：2002-12-11

主分类号：C12N9/00

申请/专利权人:四川华神集团股份有限公司

发明/设计人:秦俭;陈英;杨忠生

主申请人地址:610075四川省成都市十二桥路37号新1号华神大厦A座405

专利代理机构:成都信博专利代理有限责任公司

代理人:张澎

国别省市代码:四川;51

权利要求：

权利要求书1.家蚕基因工程植酸酶工业化感染控制方法，应用重组BmNPV载体-家蚕宿主表达系统生产植酸酶，用植酸酶基因替换家蚕核型多角体病毒基因组中的多角体蛋白基因，并使其处于多角体蛋白基因启动子的控制下，再将此重组质粒与野生型BmNPV-DNA共转染于家蚕细胞，通过体内同源重组得到带有外源植酸酶基因的重组病毒，再利用多角体蛋白基因的启动子启动植酸酶基因，并将此重组家蚕核型多角体感染家蚕，在蚕体内繁殖产生目标物植酸酶蛋白，其特征在于，以以下的手段实现病毒的工业化感染及生长控制，A)扩增的重组BmNPV滴度标定达106PF∪；注射接种深度为皮下2mm；B)蛹体用乙醇浸泡，蚕幼虫用70％乙醇棉球体表消毒；接种后蚕体喷洒氯霉素；C)接种后严格控制温度在25±1℃；一般收蚕时间：病蚕接种后4-5天；病蛹接种后5-6天为宜。