从啤酒废酵母中提取核苷酸的方法
本发明公开了一种从啤酒废酵母中提取核苷酸的方法。其步骤是先利用干燥的啤酒废酵母细胞已部分破裂的特性，基本上不用盐而将其中的核酸分解出来形成核酸液；然后不经过核酸沉淀的中间步骤，而直接利用磷酸二酯酶酶液对所得核酸液进行定向酶解，最后利用活性炭柱对所酶解的产物进行提纯而得到核苷酸成品。该方法具有工艺路线短、所提取的核苷酸产品得率高、纯度好、成本低，性能稳定等特点，且脱核后的酵母是优良的饲料，废酵母利用率高。
发明专利
CN01106512.5
2001-02-27
CN1370837
2002-09-25
C12P19/30
武汉中铁生物股份有限公司
郝全源;郑志明;陈贻∴;熊乾华;王琪;秦为民
430016湖北省武汉市武昌区紫阳路（首义小区21栋）
武汉开元专利代理有限责任公司
胡镇西
湖北;42
权利要求书一种从啤酒废酵母中提取核苷酸的方法，包括以下步骤：1)核酸液的提取：取干燥的啤酒废酵母与6～10倍体积的水混合，搅拌成均匀的浆液，调节其pH值至7.2～7.5；然后将此浆液加热升温至94～96℃，保持1.5～2小时；再将其降温至20℃～30℃，并调节其pH值至4.8～5.0；最后对此浆液进行离心分离，分离出的清液即为含有核酸的提取液，将此核酸提取液升温至80～90℃待用；2)磷酸二酯酶酶液的制备：取重量为步骤1)所得核酸提取液中纯核酸量2.8～3.2倍的利用桔青霉菌种发酵生产的麸皮霉，与9～10倍重量的水在40～50℃的温度下浸泡1～2小时，然后降温至20～30℃，滤除固体霉，再升温使清液在70℃左右保持4～6分钟后迅速降温至30℃左右，随后去除孢子，所得清液即为磷酸二酯酶酶液；3)混合酶解：将步骤1)所得的核酸提取液和步骤2)所得的磷酸二酯酶酶液相混合，在65～75℃、pH值4.8～5.5的条件下水解1～2小时，再将其pH值调至7.2～7.8，并升温至90℃左右，保持12～15分钟后，迅速降温至30～40℃，去除其中的不溶物，所得清液即为需要提纯的核苷酸粗液；4)活性炭柱提纯：将步骤3)所得核苷酸粗液的pH值调节至1.5～3.0后上活性炭柱，以每毫升炭柱每分钟0.03～0.05毫升流出液的流速上柱完毕，然后以同样的流速用软水洗脱去杂，再以同样的流速换用由40～60％的酒精和0.5～1％的氨水组成的洗脱液进行洗脱，保持炭柱在50～70℃恒温下洗脱，直至流出液经酒精检测无白色浑浊为止，所得洗脱液即为浓度约为3～5％的核苷酸精液；保持此核苷酸精液的温度为50～70℃，在真空条件下浓缩回收其中的酒精，使其中核苷酸的浓度提高至9～12％；再调节此高浓度核苷酸液的pH值至2.5～3.5，加入其体积量3～5倍的95％以上的酒精即得核苷酸沉淀；将此沉淀真空干燥即得核苷酸成品。