一种磷酯酶制剂的制备方法

摘要：

本发明公开了一种磷酯酶制剂的制备方法，首先是菌种活化，将无菌水滴入菌体的冻干管中混匀，再将菌种接在固体培养基上进行活化培养；其次是种子液的培养，将菌种接在装有液体培养基的种子罐中培养；再次是发酵液的培养，将种子液接入发酵罐中培养，接种量5～10％，通气量1∶0.3～0.5，高压0.05MPa；第四是纯化，将发酵液离心，弃去沉淀，收集上清液，分级沉淀；第五是冷冻干燥。本发明方法易行，工艺简便，酶冻干粉活力单位2000～4000u/g，具有抗血小板聚集的功能，制剂稳定性好，适合于大批量生产。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN01106417.X

申请日期：2001-01-08

公开/公告号：CN1362516

公开/公告日：2002-08-07

主分类号：C12N9/16

申请/专利权人:中国科学院武汉病毒研究所

发明/设计人:陈涛;孙松柏;宋建华

主申请人地址:430071湖北省武汉市武昌小洪山

专利代理机构:武汉科宏专利事务所

代理人:王敏锋

国别省市代码:湖北;42

权利要求：

权利要求书1、一种磷酯酶制剂的制备方法，包括磷酯酶C单胞菌属CW-W-90-3菌株，其特征是：A、菌种活化，将无菌水滴入菌种的冻干管中，混匀，再将菌种接在牛肉膏、蛋白质、葡萄糖、NaCl的固体培养基上进行活化培养；B、种子液的培养，将菌种接装有液体培养基的种子罐中培养，pH值6.5～8.0，温度25～37℃，时间8～12小时，搅拌速度200～240r/m；C、发酵液的培养，将种子液接入发酵罐中，其培养基同种子液培养基，接种量5～10％，通气量1：0.3～0.5，高压0.05Mpa；D、纯化，将发酵液经4000r/m离心，弃去沉淀，收集上清液，经30～80％(NH4)2SO4分级沉淀，再经蒸馏水溶解，离心去杂质，脱盐、浓缩；E、冷冻干燥，将精酶泥调至浓度，并加入辅料脱脂奶粉3％，在0.05Mpa以下真空环境，-40℃冷冻4小时，再升华到0℃维持10小时，最后升温到25℃，干燥6小时。