转基因抗菌肽家蝇繁育蝇蛆的方法

摘要：

本发明涉及一种电转移技术将抗菌肽基因导入家蝇受精卵，获得高效表达，繁育蝇蛆的方法，这种转基因家蝇在无限繁殖的蝇蛆的过程中设计合理营养蝇胆的饲料配方，优化繁育条件，在分离蝇蛆后利用渗透压关系加适量缓冲流，降低氧含量，再用物理学方法超声波诱导蝇蛆，以增加高活性抗菌肽在蝇蛆中的含量。按制药用抗菌肽原料要求，进行无菌繁育转基因抗菌肽工程家蝇，进行规模化饲养。用本法构建的工程蝇传代稳定，表达高，投资成本低，周期短，工艺简便，产率高，适用于产业化规模生产，宜于普及推广。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN01106192.8

申请日期：2001-02-23

公开/公告号：CN1302901

公开/公告日：2001-07-11

主分类号：C12N15/87

申请/专利权人:辽宁天成生物制药研究所

发明/设计人:苟仕金;苟鸿鹰;王成余

主申请人地址:110031辽宁省沈阳市皇姑区北陵大街28号

专利代理机构:辽宁专利事务所

代理人:李丛

国别省市代码:辽宁;21

权利要求：

权利要求书1、转基因抗菌肽家蝇繁育蝇蛆的方法，用抗菌肽Shiva-1的氨基酸基因序列，加上适宜基因工程操作的酶切位点，经人工合成2条分别为92bp和91bp的寡聚核苷酸片段，互补链延伸反应，EcoR I酶切，将完整的Shiva-1基因反向克隆至pU18载体，经PCR检测和序列分析，正确的克隆了抗菌肽Shiva-1基因，为E.coli融合表达及转基因家蝇受精的先决条件；用BAEKON6000型基因转移仪，在脉冲电压(AMPLITUDE)为1500V、脉冲时间(BRUST TIME)为15000ms、脉冲数(NUMBER OF PULSES)为1000、脉冲宽度(PULSE WIDTH)为100US、周期(CYCLE)为50、距离(DISTANCE)为2mm的条件下，使抗菌肽重组质粒Shiva-1在家蝇染色体上实现整合。