一种不需要反转录步骤的RNA分子PCR扩增法
本发明涉及一种不需要反转录的PCR RNA分子扩增法，可用于分子生物学对疾病的诊断。对病原体，尤其是RNA病毒的确诊可广泛用于用血安全等领域，本方法包括产生一种与PNA分子互补的单键DNA保护分子(PS－DNA)，这种约300个硷基对的单键DNA片断，可以和RNA(病毒)分子形成DNA∶RNA杂交键。又使用了一种抗体和一种酶将由杂交形成的DNA∶RNA杂交链通过特异性抗体结合而分离出来，再把未形成DNA∶RNA杂交链的残留PS－DNA降解，然后就可以用常规PCR放大，进行产物检测了。该法与RT－PCR法相比较具有杂交效率高于逆转录效率，特异性强，灵敏度高，成本低，操作方便等特点。将适用于多种临床用核酸检测试剂的配制和生产。
发明专利
CN01104435.7
2001-02-27
CN1311334
2001-09-05
C12P19/34
黄道培
黄道培;范辛浩
201206上海市浦东新金桥路1998号
北京万科园专利事务所
张亚军%曹诗健
上海;31
权利要求书1．一种RNA分子的PCR扩增法，该方法不需要反转录步骤，它包括下列步骤：(1)核酸杂交：将待测样品中加入裂解杂交液，混匀后再加入PS-DNA,65℃保温过夜，再加入异丙醇沉淀离心后，弃上清液；2)PS-DNA:RNA杂交链的分离将上述沉淀物悬浮于含DNA:RNA抗体的磁珠的生理盐水中，在37℃保温15分钟后收集磁体，用生理盐水洗2次。3)S1核酸酶消化将上述磁珠悬浮于含S1核酸酶的消化液中，37℃60分钟，再用生理盐水洗涤后，收集磁体。4)PCR反应将磁珠重新悬浮于上述消化液，98℃10分钟，捕集磁体，取上清液20ul作为样品加入到预先盛有PCR主反应的反应管中，进行PCR反应，检测产物。