用基因工程方法生产红细胞刺激因子/粒细胞集落刺激因子融合蛋白

摘要：

本发明涉及用基因工程方法生产红细胞生长因子/粒细胞集落刺激因子融合蛋白。通过对红细胞生长因子和粒细胞集落刺激因子的亚克隆和末端改造以及用聚合酶链反应方法，把两个基因通过一段多肽连接起来，使之形成表达质粒，将其转化进入哺乳动物细胞并得到了高效表达。该融合蛋白具有红细胞生长因子和粒细胞集落刺激因子的双重活性，与相同剂量的EPO和G－CSF单体相比，融合蛋白具有较高的生物活性。本发明EPO的生物活性为1×10⁵U/mg，其G－CSF的生物活性为1×10⁷U/mg。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN01104266.4

申请日期：2001-02-27

公开/公告号：CN1311332

公开/公告日：2001-09-05

主分类号：C12N15/63

申请/专利权人:李欣越

发明/设计人:李洪兴

主申请人地址:130042吉林省长春市北安路南二胡同103栋304

专利代理机构:上海华东专利事务所

代理人:高存秀

国别省市代码:吉林;22

权利要求：

权利要求书1．一种用基因工程方法生产红细胞刺激因子/粒细胞集落刺激因子融合蛋白，其特征在于：该EPO/G-CSF融合蛋白具有EPO和G-CSF蛋白自然顺序，并具有双重活性，其EPO的生物活性为1×105U/mg，和其G-CSF的生物活性为1×107U/mg；其结构为通过一连接片段把红细胞生长因子与粒细胞集落刺激因子连接起来，结构如下：红细胞生长因子一连接片段一粒细胞集落刺激因子EPO——LINKER——G-CSF或G-CSF——LINKER-EPO和具有EPO/G-CSF融合蛋白一级结构如下：APPRLICDSRVLERYLLEAKEAENITTGCAEHCSLNENITVPDTKVNFYAWKRMEVGQQAVEVWQGLALLSEAVLRGQALLVNSSQPWEPLQLHVDKAVSGLRSLTTLLRALRAQKEAISPPDAASAAPLRTITADTFRKLFRVYSNFLRGKLKLYTGEACRTGDRGGSGGGSAAGGSGGTPLGPASSLPQSFLLKCLEQVRKIQGDGAALQEKLVSECATYKLCHPEELVLLGHSLGIPWAPLSSCPSQALQLAGCLSQLHSGLFLYQGLLQALEGISPELGPTLDTLQLDVADFATTIWQQMEELGMAPALQPTQGAMPAFASAFQRRAGGVLVASHLQSFLEVSYRVLRHLAQP