基因改造农作物及其加工产品的定量检测方法和试剂盒
本发明公开了一种基因改造农作物及其加工产品的定量检测方法和试剂盒，属分子生物学检测领域。具体的是从基因改造农作物及其加工产品中提取脱氧核糖核酸(DNA)，应用实时多聚酶链式反应(real－time PCR)技术对基因改造农作物及其加工产品中的基因改造成分(genetically modified organisms，GMOs)进行定量检测的方法和试剂盒。采用本发明的方法和试剂盒，可以定量地判定一种农作物或其加工产品是否含有基因改造成分。
发明专利
CN01104213.3
2001-02-26
CN1370841
2002-09-25
C12Q1/68
安利忻
安利忻
100094北京市海淀区颐和山庄云锦园17楼
北京华一君联专利事务所
陈美章
北京;11
权利要求书1.基因改造农作物及其加工产品的定量检测方法，包括如下步骤：第一步、基因改造农作物及其加工产品DNA的提取(一)待测样品的前处理：粉末状的待测样品不需处理；非粉末状的固体待测样品要处理成粉末状；液态待测样品采用冷冻干燥法干燥并研碎成粉末状；新鲜的待测样品清洗干净即可：(二)提取待测样品的DNA，方法如下：DNA的提取方法一：(1)称取200毫克(mg)食品粉末，放入1.5毫升(ml)离心管中，缓慢加入700微升(μl)CTAB提取缓冲液(0.1M Tris-Cl，1.4M NaCl，20mM EDTA，20g/L CTAB，pH 8.0，使用前加入体积比为1％的巯基乙醇)，充分混匀；若是新鲜食品，则直接称取200mg放入盛有700μl提取缓冲液的1.5ml离心管中，用镊子在缓冲液中捣碎食品；(2)将离心管置于60℃水浴中，放置45分钟，期间混匀数次：(3)加入等体积氯仿，充分混匀；(4)室温下12,000rpm离心10min；(5)将上清转移到一个新的离心管中，重复氯仿抽提过程一遍；(6)将上清转移到一个新的离心管中，加入1ml树脂，充分混匀；(7)将混合液通过一个过滤柱(column)；(8)用2ml清洗缓冲液(80mM KAC，8.3mM Tris-HCl，40uM EDTA，pH 7.5)清洗过滤柱(column)，重复一遍；(9)室温下11,000rpm离心过滤柱(column)2min；(10)向过滤柱(column)上加入70℃重蒸水50μl，温育5分钟；(11)室温下11,000rpm离心过滤柱(column)2min；(12)收集洗脱液；(13)用紫外分光光度计测定DNA的浓度，稀释成终浓度为50ng/μl，储存于-20℃冰箱，备用；DNA的提取方法二：(1)称取200mg食品粉末，放入1.5ml离心管中，缓慢加入860μl提取缓冲液(10mM Tris，150mM NaCl，2mM EDTA，1％SDS，pH 8.0)，充分混匀；若是新鲜食品，则直接称取200mg放入盛有860μl提取缓冲液的1.5ml离心管中，用镊子在缓冲液中捣碎食品；1