使用不同的核苷酸混合物的DNA测序方法和用于该方法的试剂盒

摘要：

本发明涉及采用双脱氧核苷酸介导的链终止反应的DNA核苷酸序列分析方法，更具体地讲，涉及通过一步分离步骤进行DNA序列分析的测序方法，所述DNA序列比可由常规桑格测序法所能分析的序列长度更长，该方法的特征在于：采用其双脱氧核苷酸与脱氧核苷酸的摩尔比彼此不同的两种核苷酸的混合物来产生DNA片段。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN00803086.3

申请日期：2000-11-25

公开/公告号：CN1338004

公开/公告日：2002-02-27

主分类号：C12Q1/68

申请/专利权人:株式会社百尼尔

发明/设计人:朴韩浯;俞在亨

主申请人地址:韩国忠清北道

专利代理机构:中原信达知识产权代理有限责任公司

代理人:丁业平%王维玉

国别省市代码:韩国;KR

权利要求：

权利要求书1.一种采用双脱氧核苷酸介导的终止反应的DNA核苷酸序列分析方法，其特征在于包括：1)制备下列反应混合物的步骤其中包括ddGTP与dGTP的摩尔比高于0.05的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；其中包括ddATP与dATP的摩尔比高于0.058的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；其中包括ddTTP与dTTP的摩尔比高于0.1的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；和其中包括ddCTP与dCTP的摩尔比高于0.0033的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；2)制备下列反应混合物的步骤其中包括ddGTP与dGTP的摩尔比低于0.02的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；其中包括ddATP与dATP的摩尔比低于0.02的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；其中包括ddTTP与dTTP的摩尔比低于0.02的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；和其中包括ddCTP与dCTP的摩尔比低于0.02的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；3)分别向以上步骤1)和2)中制备的上述8种反应混合物中添加模板DNA和引物来产生互补DNA片段的步骤；4)将步骤3)中获得的互补DNA片段按照ddNTP的种类分别进行混合并按分子量顺序对如此制备的各互补DNA片段的混合物进行分离的步骤；5)通过识别如上分离的所述互补DNA片段的末端碱基来确定模板DNA核苷酸序列的步骤。