一种快速有序的基因表达差异显示法

摘要：

本发明更快了一种经济、高效、快速的基因表达水平有序差异显示法。它主要用于系统地比较基因表达整体状况的差异，寻找差异基因。首先，双链cDNA的合成使用随机引物和配基标记的oligo(dT)引物；其次，具有配体涂层的薄壁管用于吸附标有配基的cDNA3′端酶切片段。吸附的双链cDNA酶切、洗脱后与接头连接。再经第一轮PCR扩增和第二轮选择性PCR扩增，从而获得清晰的3′ESTs离散图谱。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN00127496.1

申请日期：2000-11-22

公开/公告号：CN1354259

公开/公告日：2002-06-19

主分类号：C12Q1/68

申请/专利权人:中国科学院上海生物工程研究中心

发明/设计人:李荣秀;康建胜;王志平

主申请人地址:200233上海市漕宝路500号

专利代理机构:上海专利商标事务所

代理人:徐迅

国别省市代码:上海;31

权利要求：

权利要求书1.一种显示基因表达水平有序差异的方法，其特征在于，它包括步骤：(a)对mRNA，使用随机引物和配基标记的oligo(dT)引物，合成双链cDNA；(b)用具有配体的涂层的反应容器吸附标有生物素的cDNA扩增产物，其中该配体与步骤(a)中配基特异性结合；(c)用限制性内切酶消化cDNA扩增产物，产生吸附于反应容器的3′端酶切片段和未吸附的酶切片段；(d)洗脱除去未吸附的酶切片段；(e)将吸附于容器的3′端酶切片段与接头连接，形成连接产物，所述接头由长链和短链构成；(f)对连接产物进行第一轮PCR扩增，形成第一轮PCR扩增产物；(g)对第一轮PCR扩增产物进行第二轮PCR扩增，形成第二轮PCR扩增产物；(h)对第二轮PCR扩增产物进行凝胶电泳分离。