高效表达乙肝表面S（主蛋白）和前S1（大蛋白）融合抗原的转基因哺乳动物细胞系

摘要：

在乙肝表面抗原PreS1(21－47)基因片段与S基因的第223位相连的基础上在其下游引入RNA加聚A信号AATAA、乙肝病毒增强子1(En1)和增强子2(En2)，及突变的x基因(mX)构成pCHBSS1G质粒。将pCHBSS1G质粒与pSV2dhfr质粒转化到CHO－dhfr^－细胞，经克隆加MSX及MTX筛选扩增，获得了高效表达乙肝表面抗原S和前S1融合蛋白的一系列基因工程细胞系(GdSS1－X)，SS1融合蛋白在SDS－PAGE中显出27KD，30KD的蛋白条带，小鼠免疫可产生针对S和S1的特异性抗体。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN00123612.1

申请日期：2000-08-31

公开/公告号：CN1309181

公开/公告日：2001-08-22

主分类号：C12N15/09

申请/专利权人:中国预防医学科学院病毒学研究所

发明/设计人:田淑芳;阮力;刘文军;杨芙蓉;宗芳;李军;陈红;王文;阮薇琴;王秀平

主申请人地址:100052北京市宣武区迎新街100号

国别省市代码:北京;11

权利要求：

权利要求书1．一种含有乙肝病毒adr亚型表面抗原S+S1融合基因的重组质粒pCHBSS1G,此质粒的结构特点是：复制方向从左至右，其排列顺序是PBR322的复制起点→CMV-1E的0.75kb的启动子→乙肝表面抗原S+S1融合基因SS1→增强子EN1,En2及使用缺失突变使X基因自ATG后第8位bp起缺失16个bp，从而失去表达X基因的可能，降低致癌性→SV40的复制起点，早期启动子→GS基因，此基因是从CHO-dhfr-细胞中经PCR获得的→SV40的多聚A位点；质粒结构中的乙肝表面抗原S+S1融合基因SS1在前，谷氨酰胺合成酶扩增基因GS在后，它们是分别在CMV立即早期启动子及SV40早期启动子的调控之下；乙肝表面抗原S+S1基因是前S1第21-47基因片段与S基因3’端的第223位相连的融合基因。